產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
2×Hieff® Robust PCR Master Mix (With Dye)選用改造的Taq DNA Polymerase，添加強(qiáng)力延伸因子、擴(kuò)增增強(qiáng)因子以及優(yōu)化的緩沖體系，擴(kuò)增速度和擴(kuò)增產(chǎn)量較普通PCR Mix有了質(zhì)的飛躍。擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb，適用于快速PCR反應(yīng)，1 kb以內(nèi)的極限擴(kuò)增速度可達(dá)5 sec/kb，大幅節(jié)省PCR反應(yīng)時(shí)間。預(yù)混液中含有dNTP、Mg2+，使用時(shí)只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，大大簡化實(shí)驗(yàn)的操作步驟。Mix中含有電泳指示染料，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行電泳，使用方便。體系中加入的保護(hù)劑使得Master Mix經(jīng)過反復(fù)凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可輕松克隆至T載體。
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說明
PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件（推薦冰上配制）
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組分 |
體積 (μL) |
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循環(huán)步驟 |
溫度 (°C) |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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模板DNA |
適量 |
預(yù)變性 |
94 |
3-5 min |
1 |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 |
變性 |
94 |
10 sec |
30-35 |
|
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Primer反向 (10 μM） |
2.5 |
退火 |
55 |
20 sec |
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2×Hieff® Robust PCR Master Mix |
25 |
延伸 |
72 |
15-30 sec/kb |
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ddH2O |
to 50 |
終延伸 |
72 |
5 min |
1 |
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表1 擴(kuò)增體系（50 μL） |
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表2 擴(kuò)增條件 |
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【注】：使用前請(qǐng)務(wù)必將其徹底混勻。
1）模板使用量：人基因組DNA：30-100 ng；大腸桿菌基因組DNA：10-100 ng；λDNA：0.5-5 ng；質(zhì)粒DNA：0.1-10 ng。
2）Mg2+濃度：本產(chǎn)品中含有3 mM的MgCl2，適合大部分PCR反應(yīng)。
3）退火溫度：請(qǐng)參考引物的理論Tm值，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值1-2℃。
4）延伸速度：長度1 kb以內(nèi)的基因可選擇5-15 sec/kb。
注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)體系需在冰上配制，體系混勻后快速置于PCR儀進(jìn)行反應(yīng)。
2.本產(chǎn)品PCR產(chǎn)物不適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。
3.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
4.本產(chǎn)品僅作科研用途！
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