產(chǎn)品描述

脫氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一種發(fā)現(xiàn)于多種細(xì)胞和組織的核酸內(nèi)切酶，靶向切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團(tuán)、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。DNase可催化多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）。最佳的工作范圍是pH7-8，DNase的活性依賴于Ca²⁺，并可被二價(jià)金屬離子如Co ²⁺，Mn²⁺，Zn²⁺等激活。5 mM Ca²⁺可保護(hù)酶使其不被水解。在Mg²⁺存在下，該酶可隨機(jī)識(shí)別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn²⁺存在的條件下，可同時(shí)識(shí)別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動(dòng)物胰腺也是該酶的最主要的來源之一。
本品來自牛胰腺，由四種色譜區(qū)分的組分A，B，C，D構(gòu)成，摩爾比為4:1:1，而D組分非常少。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使標(biāo)記堿基插入DNA。本品以含氯化鈣的凍干粉形式供應(yīng)，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

CAS號(hào)（CAS NO.）	9003-98-9
分子量（Molecular Weight）	~31 kDa
孔尼茨單位（Kunitz Units）	≥2000 Kunitz Units/mg protein
類型（Type）	Type IV
最佳PH（Optimal pH）	7～8
外觀（Appearance）	白色至淺褐色凍干粉
純度（Purity）	Protein:≥80% by Biuret
溶解性（Solubility）	0.15 M NaCl：5 mg/mL，無色透明溶液
激活劑（Activators）	多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+, Ca2+, Co2+, and Zn2+
抑制劑（Inhibitors）	β-巰基乙醇；螯合劑；SDS；肌動(dòng)蛋白
活力單位定義（Unit   Definition）	25℃，pH5.0條件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分鐘ΔA260增加0.001的變化定義為一個(gè)酶活力單位（Kunitz unit）。

 

運(yùn)輸和保存方法 

冰袋運(yùn)輸。凍干粉末于-20℃保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

DNase Ⅰ儲(chǔ)存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl₂，0.1 mM PMSF，50%甘油。

 

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至終濃度為2.5 mM后，65℃加熱10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達(dá)到毫摩爾/升濃度的鋅離子，0.1%的SDS，DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100 mM以上鹽濃度均對(duì)DNase Ⅰ有顯著抑制作用。

 

使用方法（應(yīng)用于蛋白提取實(shí)驗(yàn)，僅供參考）

1）反應(yīng)體系：蛋白提取液中按照1/100體積加入DNase I儲(chǔ)存液（使其終濃度為20 U/mL），1/100體積加入1 M MgCl₂。

2）反應(yīng)條件：37℃，30-60 min。繼續(xù)后續(xù)蛋白提取實(shí)驗(yàn)即可。

【注】由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否則會(huì)降低DNase I的消化能力。

HB210811