產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過(guò)基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來(lái)切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內(nèi)皆有活性（見(jiàn)表1），使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His標(biāo)簽，通過(guò)Ni-NTA樹(shù)脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。
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表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
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反應(yīng)時(shí)間（h） |
不同溫度下剪切活性（%） |
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4℃ |
16℃ |
21℃ |
30℃ |
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1 |
34 |
58 |
56 |
70 |
|
2 |
58 |
80 |
78 |
90 |
|
3 |
71 |
99 |
99 |
99 |
|
3.5 |
84 |
99 |
99 |
99 |
產(chǎn)品性質(zhì)
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來(lái)源（Source） |
大腸桿菌 |
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外觀（Appearance） |
無(wú)色透明液體 |
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比活力（Specific Activity） |
5 U/μL |
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活性定義（Unit Definition） |
在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應(yīng)1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。 |
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純化（Purification） |
Ni柱親和純化 |
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純度（Purity） |
≥95%（by SDS-PAGE） |
產(chǎn)品組分
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編號(hào) |
組分名稱 |
產(chǎn)品貨號(hào)/規(guī)格 |
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20403ES80/ （1000 U） |
20403ES92 （10×1000 U） |
20403ES10 （10 KU） |
20403ES50 （50 KU） |
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20403-A |
rTEV Protease（5 U/μL） |
200 μL |
10×200 μL |
2×1 mL |
10 mL |
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20403-B |
rTEV Buffer （10×） |
600 μL |
10×600 μL |
6 mL |
30 mL |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。rTEV Buffer于-20℃保存，一年穩(wěn)定。rTEV Protease，-20℃保存，6個(gè)月穩(wěn)定；-80℃長(zhǎng)期保存，一年穩(wěn)定。建議收到貨或者第一次使用時(shí)分裝各組分保存，避免反復(fù)凍融。
應(yīng)用實(shí)例
1. 在EP管中配制如下反應(yīng)體系。
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組分 |
用量 |
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融合蛋白 |
40 μg |
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rTEV Protease (5 U/μL) |
4 μL |
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rTEV buffer（10×） |
10 μL |
2. 30℃孵育2h或4℃過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 影響天然TEV酶活性的常見(jiàn)因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制劑；2）Zn離子濃度（>5 mM），同樣對(duì)rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
HB221013
