產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

重組牛腸激酶（rb-EK）是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，其氨基酸序列與牛源腸激酶輕鏈一致，有著和天然提取的腸激酶同樣特異的酶切位點(diǎn)，切割位點(diǎn)是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys（DDDDK），可用于去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽，保障重組融合蛋白準(zhǔn)確的N端序列，同時(shí)重組牛腸激酶具有比天然酶更高的切割活性。

翌圣大腸桿菌表達(dá)重組牛腸激酶（不帶標(biāo)簽）為采用大腸桿菌表達(dá)的高純度、高活性、高特異的牛腸激酶，不含其他蛋白酶，可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標(biāo)簽，由于具有極高酶切活性，酶切反應(yīng)使用量少，不影響下游蛋白應(yīng)用，可不考慮除去。

另外我司還提供酵母表達(dá)重組牛腸激酶(His標(biāo)簽)（Cat#20395ES）, 客戶(hù)可根據(jù)來(lái)源（大腸桿菌或酵母表達(dá)）、標(biāo)簽（是否帶His標(biāo)簽）等選擇適合您的重組牛腸激酶。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	20401ES60 / 20401ES70 / 20401ES76 / 20401ES80 / 20401ES90
規(guī)格	100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

來(lái)源（Source）	大腸桿菌表達(dá)
分子量（Molecular Weight）	理論值25.85 kDa
外觀（Appearance）	澄清、無(wú)色至淡黃色液體
酶濃度（Enzyme Concentration）	≥5 U/uL
活性定義*（Activity Definition）	一個(gè)活性單位定義為25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0緩沖體系下，將50 μg帶有腸激酶酶切位點(diǎn)的融合蛋白（翌圣腸激酶酶切陽(yáng)性底物，分子量約64.6 KDa，Cat#20391ES）切開(kāi)95%所需要的酶量。
內(nèi)毒素檢測(cè)（Endotoxin）	用LAL法測(cè)定內(nèi)毒素含量小于1 EU/μg
質(zhì)量保證（Quality assurance）	經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶；不含其他蛋白酶，無(wú)非特異性切割
緩沖體系（Buffer）	50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50% Glycerol

活性定義：^*不同底物，酶切效率可能不同；一般蛋白越小，切割效率越高，翌圣酶活定義為采用分子量約64.6 KDa的大蛋白，對(duì)于寡肽底物一般最大可達(dá)到1U切500 ug。

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。盡量避免反復(fù)凍融（5次以?xún)?nèi)，無(wú)活性損失）

 

使用方法（應(yīng)用舉例）

 

【注】該酶效力高且待切蛋白結(jié)構(gòu)性質(zhì)不同，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索酶使用濃度及酶切反應(yīng)時(shí)間。

1. 反應(yīng)體系
2. 反應(yīng)條件：25°C過(guò)夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。

融合蛋白	50 μg
Enterokinase	0.1-1 U (可根據(jù)蛋白大小和實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整)
緩沖體系（25 mM Tris-HCl pH 8.0）	Up to 50-500 μL（最終反應(yīng)體系中蛋白濃度為0.1-1 mg/mL）

【注】重組腸激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀釋成每1 μL含0.1 U的溶液使用。

4°C低溫酶切條件：4°C能對(duì)底物進(jìn)行有效酶切，但需要延長(zhǎng)酶切時(shí)間至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品所講述的緩沖體系需要自行配置。
2. 不建議37℃條件下酶切，可能會(huì)有非特異性酶切出現(xiàn)。
3. 在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切會(huì)受到影響。如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種，為獲得理想的酶切結(jié)果，請(qǐng)先將樣品透析到25 mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，然后再進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn)；若不方便透析，可將樣品稀釋到咪唑含量在100 mM以下，NaCl濃度在50 mM以下，甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白比例不變；若干擾因素很多，且不便去除，需要適當(dāng)增加酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間，有助于得到理想的酶切效果。
4. 磷酸鹽對(duì)Enterokinase有很強(qiáng)的抑制作用，痕量的磷酸鹽都會(huì)嚴(yán)重影響Enterokinase的活性，因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。
5. 本品是具有高酶活力重組腸激酶，切割蛋白使用量少，可不考慮除去。后續(xù)如需去除重組腸激酶，可用陰離子交換樹(shù)脂（如DEAE-FF）對(duì)其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下：

平衡緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

洗脫緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
      6. 蛋白酶切效果不好，可適當(dāng)增加酶量，或適當(dāng)延長(zhǎng)酶切時(shí)間。

       7. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

       8. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20250122