產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細(xì)胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結(jié)合一個染料。PI也能與RNA結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最大激發(fā)/發(fā)射波長是493/636 nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號明顯增強20-30倍，最大激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40 nm，最大發(fā)射波長向藍色波段遷移~15 nm，從而使其最大激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?35/617 nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標(biāo)記抗體，只需要使用恰當(dāng)?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀以及熒光計分析。
PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外，但是可以穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用，同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑，兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細(xì)胞周期的檢測。
本品是溶于水的PI 儲存液，濃度為1mg/mL，只需用合適的緩沖液稀釋到工作液即可。
產(chǎn)品性質(zhì)
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英文同義名（English synonym） |
2,7-Diamino-9-phenyl-10(diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide. |
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CAS號（CAS NO.） |
25535-16-4 |
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分子式（Formula） |
C27H34I2N4 |
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分子量（Molecular Weight） |
668.4 |
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外觀（Appearance） |
暗紅色結(jié)晶 |
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純度（Purity） |
≥95% by HPLC |
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溶解性（Solubility） |
溶于水（1 mg/mL） |
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熒光光譜 （Fluorescence Spectral） |
水溶液，PI的Ex/Em= 493/636 nm；PI-核酸的Ex/Em= 535/617 nm；熒光可用氙氣燈，泵弧燈或者488 nm氬離子激光激發(fā)。通常情況下，用流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測。 |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。4 ºC避光保存，至少1年穩(wěn)定。
注意事項
1）碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1. 貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟（熒光顯微鏡檢測）
1） 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適步驟固定細(xì)胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復(fù)染要求細(xì)胞經(jīng)透化處理。
2） RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20 min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1 min。
3） 復(fù)染：
a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；
b，直接用2×SSC稀釋1 mg/mL(1.5 mM)PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300 µL染液足夠用于一個蓋玻片細(xì)胞制片。染色1-5 min。
c，2×SSC清洗幾次，流盡多余液體，加入抗淬滅劑封片(Yeasen,Cat#36308ES08)。
d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
2. 懸浮細(xì)胞復(fù)染步驟（流式細(xì)胞儀檢測）
1）樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞?；蛘呤褂萌缦碌牟襟E：
a. 收集細(xì)胞，密度約2×105~1×106。離心后吸除上清，輕彈管壁就剩下的液體重懸細(xì)胞。加入1 mL常溫存放的PBS；
b. 將所有的重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移到4 mL于-20ºC預(yù)冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添加細(xì)胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20ºC乙醇中固定5-15 min。
c. 離心收集細(xì)胞，除去乙醇。輕彈管壁以彈松細(xì)胞后，加入5ml室溫的PBS。允許細(xì)胞水化15 min；
2）復(fù)染
a. 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀釋1 mg/mL（1.5 mM）PI儲存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1 mL的PI染色液足夠用于每個細(xì)胞樣本的檢測?！?/span>注】：工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實驗體系調(diào)整，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲存液到需要的濃度。
b. 樣本制備的最后一步后離心收集細(xì)胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室溫孵育15 min后，流式細(xì)胞儀進行細(xì)胞分析。若用顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細(xì)胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。
3. 染色質(zhì)FISH復(fù)染步驟
1）樣本準(zhǔn)備：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟制備樣本。復(fù)染之前的最后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖液。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。
2）復(fù)染
a. 工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/mL(1.5 mM)的PI儲存液1:1000，得到1.5 µM的PI染色工作液。滴加300 µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）?？墒褂盟芰仙w玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如果加入RNase則37ºC孵育。
b. 去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料。
c. 用吸水紙圍繞樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片用石蠟或指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。
d. 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
HB220518
