——靈敏、簡便、低毒

 

>>>產(chǎn)品背景

細胞功能實驗中，對于細胞增殖、毒性和活力的檢測是至關重要的。目前常用的細胞增殖與活性檢測試劑通常是通過基于線粒體內(nèi)的脫氫還原酶的還原能力來進行檢測的，如MTT法，XTT法，WST-1法，CCK法等。

翌圣生物推出一款基于WST-8的細胞活性檢測試劑盒—Cell Counting Kit簡稱CCK試劑盒，相較于MTT等其細胞毒性更低，檢測更靈敏，操作更簡便。

>>>實驗原理

WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）在電子耦合載體1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（formazan），顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。

表1. CCK法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較

檢測方法	MTT法	XTT法	WST-1法	CCK 法
甲臜產(chǎn)物的水溶性	差（需加有機溶劑溶解檢測）	好	好	好
產(chǎn)品性狀	粉末	2瓶溶液	溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	現(xiàn)配現(xiàn)用	即開即用	即開即用
檢測靈敏度	高	很高	很高	高
檢測時間	較長	較短	較短	短
檢測波長	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
細胞毒性	高，細胞形態(tài)完全消失	很低，細胞形態(tài)不變	很低，細胞形態(tài)不變	很低，細胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性	一般	較差	一般	很好
批量樣品檢測	可以	非常適合	非常適合	非常適合
便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便捷

>>>產(chǎn)品特點

操作簡單：產(chǎn)品本身是液體，即開即用；甲臜產(chǎn)物是水溶性的，不需要用有機溶劑溶解。

靈敏度高：線性范圍廣，靈敏度高，重復性好。

細胞毒性低：細胞毒性非常低，對后續(xù)實驗沒有影響。

穩(wěn)定性好：培養(yǎng)液中酚紅和血清的存在不會對檢測造成影響。

應用性廣：可用于大規(guī)模、高通量樣品檢測。

>>>適用范圍

細胞增殖測定、細胞毒性、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗、生物因子的活性檢測等

>>>產(chǎn)品數(shù)據(jù)

同類產(chǎn)品性能比較：

 

細胞類型：293T人胚腎細胞；培養(yǎng)基：10% FBS 高糖DMEM培養(yǎng)基

孵育時間：3h；細胞數(shù)目：1000

引用已發(fā)表文獻數(shù)據(jù)

GIST-T1細胞增殖檢測 CRTL為空白對照組，Lv-shNC為陰性干擾組，Lv-shOrai1為Orai1敲除組	ROS17/2.8細胞增殖檢測 WT為野生型，KO為BK基因敲除組
rMSCs細胞活性檢測 在2.5,5,10,20ug/mL的濃度 G/SWCNT hybrids, G, and SWCNTs處理下的細胞活性檢測	rMSCs細胞增殖檢測 G/SWCNT hybrids 在2.5,5,10,20ug/mL的濃度下處理1,3和7天細胞活性檢測
Huh6細胞干擾EZH2基因和陰性對照組細胞活性檢測	HepG2細胞干擾EZH2基因和陰性對照組細胞活性檢測
GIST-T1 細胞活性檢測 分別在2-APB 不同濃度0, 50, 100, and 150µM處理下的細胞活力檢測	GIST-T1 細胞活性檢測 分別在SKF-96365不同濃度下 0, 0.5, 1.0, and 1.5µM處理下胞活力檢測

 

>>>FAQ

Q1：CCK的保存和穩(wěn)定性如何？

答：CCK穩(wěn)定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經(jīng)常使用建議4℃保存，避免反復凍融。CCK正常顏色為粉紅色，若顏色發(fā)生明顯偏差，質量可能有發(fā)生變化。

Q2：CCK的細胞毒性如何？

答：CCK毒性非常低，因此CCK檢測完后相同的細胞還能用于其它細胞增殖檢測如結晶紫染色法，中性紅染色法或DNA熒光染色法。

Q3：CCK會對活細胞進行染色嗎？

答：不會，首先WST-8不會進入細胞染色，整個顯色反應都是在培養(yǎng)體系中進行的。另外WST和WST-8甲臜都屬于高度水溶性組分，反應結束更換新的培養(yǎng)液，即可清除外源組分。

Q4：做細胞活性檢測時，每孔應該接種多少個細胞？

答：當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000個/孔(100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100 μL培養(yǎng)基)。

Q5：若是使用6孔或者24孔板進行試驗，CCK試劑使用量怎么樣呢？

答：如果要使用6孔板或24孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。

Q6：培養(yǎng)基的本底顏色如酚紅會不會影響細胞活性的檢測呢？

答：不會的，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不會對檢測造成影響。

Q7：能否用384孔板進行細胞增殖與活性檢測的實驗呢？

答：可以，CCK8產(chǎn)品的使用量為每孔培養(yǎng)基總體積的10%。建議先將CCK8產(chǎn)品稀釋一倍，然后加入培養(yǎng)基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。

Q8：只可以在450 nm波長處測OD值嗎？

答：可以在450 nm波長處測OD值，但是若無此波長的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度高。

Q9：若是暫不檢測OD值，該如何處理？

答：若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化

Q10：在加入CCK-8時可否不更換培養(yǎng)基？

答：一般情況下可以不更換培養(yǎng)基。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質的話，有可能會產(chǎn)生誤差，必須更換其它培養(yǎng)基。

Q11：在實驗中OD值太高，怎么解決？

答：可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。例如：可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間由2小時縮短為1小時。此外，可適當減少細胞的數(shù)量。

Q12：如果OD值太低，怎么解決？

答：可以采取2個辦法：1、適當增加細胞數(shù)量 2、延長加入CCK-8試劑后的反應時間。

Q13：應該每次做標準曲線嗎？

答：建議每次做。雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態(tài)不一定一樣。對于狀態(tài)不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。

 

>>>產(chǎn)品使用客戶已發(fā)表文章

 

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產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
Cell Counting Kit（CCK8）CCK-8試劑盒	40203ES76	500 T
	40203ES80	1000 T
	40203ES88	3×1000 T
	40203ES92	10×1000 T

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HB20190215