RNase污染無處不在
 

RNase（Ribonuclease，核糖核酸酶）是一類能夠催化RNA降解為小分子RNA的核酸酶，廣泛存在于真核、原核生物的所有細胞和組織中，通常有極強活性，RNA樣本中微量的RNase污染足以導致其完全降解。實驗室中RNase污染的主要來源有：

一、外源性污染源：

1）實驗中使用的水溶液、反應體系的各組分試劑、槍頭等在內的實驗耗材；

2）實驗大環(huán)境的污染，RNase 存在于空氣、灰塵和大多數(shù)物體表面；

3）實驗人員的皮膚或唾液等。

 

二、內源性污染源：

所有組織樣品均含有內源性RNase。
 

如何從源頭上避免RNase污染

RNase的無處不在，使得實驗過程中，難以保存RNA樣本的完整性，導致實驗失敗或影響RNA分析的結果。因此，從源頭上避免RNase污染十分必要，一方面要嚴格控制外源性RNase的污染，另一方面要最大限度地抑制內源性的RNase。

 

一、控制外源性RNase污染的方法：

1. 操作人員全副武裝

在實驗過程中戴手套可避免源自人手的RNase污染；觸摸皮膚、門把手及普通物體表面后更換手套；

2. 使用專業(yè)儀器與試劑

RNA操作專用的移液槍；使用RNase-free的槍頭和離心管；使用RNase-free的化合物與試劑；

3. 選擇實驗操作環(huán)境

遠離/遮蔽通風孔或開放窗口，走動較少的區(qū)域作為RNase-free區(qū)域；

4. 其他注意的點

在RNA提取和分析期間，不要進行其他可能引起RNase 污染的實驗。

 

二、抑制內源性RNase活性的方法：

1. 樣本保存

組織取樣后若不直接提取RNA，要及時用液氮迅速冷凍存于-80°C環(huán)境，并盡早進行實驗，這樣可使RNA的降解達到最少。

2. 添加抑制劑

在細胞裂解液中加入RNase 抑制劑（RNase inhibitor），使破碎細胞與滅活RNase 同步進行，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNase的活性。
 

RNase抑制劑可有效避免RNase污染

RNase抑制劑（RNase inhibitor，簡稱RNasin）是存在于人的胎盤中的一種特異性RNase抑制劑，能夠特異地與RNase以非共價鍵結合形成復合體，造成RNase失活，從而保護RNA的完整度。目前，RNasin主要用于cDNA合成，體外轉錄，體外翻譯，以及mRNA-protein復合物分離純化等過程中保護RNA不被降解，還可用于特定RNase活性的鑒定等。
 

翌圣生物高品質鼠源RNase抑制劑

翌圣生物Murine RNase Inhibitor是以可溶形式在大腸桿菌中表達純化的重組鼠源RNase抑制劑，能夠廣泛抑制各種類型RNase(RNase A, B, C)可用于RT-PCR/RT-qPCR，解決體外轉錄中RNA降解問題，抑制RNA分離純化過程中RNase的活性。與人源RNase inhibitor相比， RNase Inhibitor不含人源蛋白中的兩個對氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性，且更加適合于對高DTT敏感性的實驗(如qPCR)。

 

1.產品特點

1）廣譜的RNase抑制活性：可抑制包括RNase A、RNase B、RNase C等在內的RNase。

2）兼容廣泛的反應條件：在pH 5.0至9.0條件下和25℃至60℃的溫度下都具有活性，適用于熱穩(wěn)定型逆轉錄酶（55℃-60℃）。

3）兼容廣泛的下游實驗：對SP6、T7或T3 RNA聚合酶，AMV、M-MLV逆轉錄酶和Taq DNA聚合酶酶活性無影響。

4）規(guī)模化量產：單次生產達20億U產能，確保了產品的均一性、穩(wěn)定性和供貨的及時性，有利于成本控制。

5）批間穩(wěn)定性：成熟的蛋白表達和純化平臺，符合ISO13485質量管理體系，根據(jù)質量標準進行質控檢測，保證批次間產品的穩(wěn)定性。

 

2. 產品性能

1）RNase Inhibitor可有效抑制RNase活性

 

圖1. 1μL RNase inhibitor可有效抑制5ng RNase，1μg HEK細胞總RNA電泳結果圖。
 

2）RNase Inhibitor在qPCR實驗中表現(xiàn)優(yōu)于國際同類產品

在相同實驗條件下，以qPCR方法分別對翌圣和R*公司的鼠源RNase抑制劑（MRI）的抑制效果進行檢測，翌圣鼠源RNase抑制劑能有效抑制體系中的RNase A，抑制效果優(yōu)于競品。
 

圖2. R* MRI抑制RNase能力測試。
 

注：圖中曲線從左到右依次為：PC（僅RNA，無RNase和MRI）、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、NC（RNA+RNase、無MRI）。

 

圖3. Yeasen MRI抑制RNase能力測試。

注：圖中曲線從左到右依次為：PC（僅RNA，無RNase和MRI）、80 U MRI、60 U MRI、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、NC（RNA+RNase、無MRI）。
 

 

圖4. Yeasen MRI與R* MRI的RT-qPCR CT值結果。

FAQ
 

1. Murine RNase inhibitor是否會影響RT-PCR和qRT-PCR實驗？

答：不會影響。經(jīng)質量測試，每批次Murine RNase inbitior均不含有基因組污染，可適用于RT-PCR和qRT-PCR實驗。

2. 在使用Murine RNase inhibitor配制反應體系時，有什么注意事項？

答：配制體系時，在其他可能引入RNase污染來源的組分加入前，RNase inhibitor可首先加入。

3. Murine RNase inhibitor具有核酸內切酶及核酸外切酶活性嗎？

答：無核酸內切酶及核酸外切酶活性，有助于提高產物得率。

訂購信息

產品定位	產品名稱	產品貨號
RNase抑制劑	Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑	10603ES
無甘油版RNase抑制劑	Murine RNase Inhibitor(40 U/µL,Glycerol-free) 無甘油鼠源RNase抑制劑	10701ES
熱啟動Taq酶	Hieff Unicon® Hotstart Direct Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	10717ES
高靈敏度Bst酶	Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)	14402ES
Taq酶單克隆雙封閉抗體	Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody	31303ES
適合RT-Lamp的反轉錄酶	Hifair® III Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11111ES
適合RT-qPCR的反轉錄酶	Hifair® V Reverse Transcriptase(200 U/μL)	11300ES
熱敏UDG	Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile (1 U/μL)	10303ES
高純度dNTP Mix	dNTP Mix (10 mM each)	10124ES
高純度dUTP	dUTP（100 mM）	10128ES

注：以上所有的酶都有高濃度或無甘油版形式，詳情咨詢18186211438。