比如研究發(fā)現(xiàn)外泌體的miRNA分子是心臟結(jié)節(jié)病的標(biāo)志物^【1】，外泌體miRNA全轉(zhuǎn)錄組測序鑒定多發(fā)性硬化癥分子標(biāo)志物^【2】。2016年作者通過基因測序以及MTT試驗等，識別分離自卵巢癌細(xì)胞和卵巢癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)和脂肪細(xì)胞(CAA)外泌體中的差異miRNA，發(fā)現(xiàn)外泌體miR21通過靶向APAF1促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，證明了miRNA調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞基因表達(dá)的作用機(jī)制。^【3】

圖1. 外泌體miR21通過抑制AFAP1影響卵巢癌細(xì)胞耐藥性

目前外泌體循環(huán)RNA（lncRNA）已經(jīng)成為早期癌癥檢測的有效分子標(biāo)志物，以及早期癌癥治療的有效治療靶點(diǎn)。2018年Molecular Cancer發(fā)表了一篇，作者通過分離早期胃癌患者和正常人的外泌體，首次通過lncRNA測序、外泌體lncRNA診斷能力分析等手段，篩選出外泌體lncRNA可以做為潛在的早期胃癌生物標(biāo)志物^【4】。除此之外，2019年EBioMedicine期刊上，作者發(fā)表了一篇關(guān)于外泌體circPTGR1可以降低miR449a–MET相互作用，破壞腫瘤細(xì)胞穩(wěn)定性，有望可以作為肝癌的早期檢測的標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。^【5】

圖2. 血漿外泌體lncUEGC1的AUC值較高^【4】

外泌體tRNA是一種主動的調(diào)控因子，參與細(xì)胞增殖與細(xì)胞分化過程，在乳腺癌、肝癌、胸腺等疾病中特異性表達(dá)，這種表達(dá)特異性與與許多疾病病理相關(guān)聯(lián)，賦予tRNA更好的生物標(biāo)志物潛力。四川大學(xué)魏霞蔚課題組于《Molecular Cancer》雜志發(fā)表文章，通過小RNA測序技術(shù)和分析健康人血漿和肝癌患者的外泌體tsRNA（tRNA衍生的小RNA）的水平差異，發(fā)現(xiàn)了肝癌患者血漿外泌體中四種tsRNA(tRNA-ValTAC-3、tRNA-GlyTCC-5、tRNA-ValAAC-5和tRNA-GluCTC-5)水平顯著增加，揭示了血漿外泌體tsRNA可作為一種新型的腫瘤診斷分子標(biāo)志物，奠定了外泌體tsRNA在腫瘤診斷中的潛在價值。^【6】

圖3. 腫瘤細(xì)胞的分泌外泌體中的tsRNA譜圖^【6】

近年來許多文獻(xiàn)報道，前列腺癌細(xì)胞/肺癌細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長，是早期腫瘤診斷的有效途徑。加利福利亞大學(xué)Robert Blelloch教授在《Cell》雜志，展示了外泌體PD-L1蛋白可以通過另一種機(jī)制抑制腫瘤增殖。作者通過比較兩種腫瘤細(xì)胞分泌PD-L1蛋白水平的差異，發(fā)現(xiàn)外泌體中PD-L1可以抑制腫瘤生長，以及抑制淋巴T細(xì)胞的活化，成為腫瘤發(fā)展的主要調(diào)控因子，且抑制作用具有長期性。^【7】 

圖4. 外泌體PD-L1抑制結(jié)直腸癌模型的腫瘤進(jìn)展^【7】

除此之外，外泌體的脂類物質(zhì)也是目前比較火熱的研究對象，目前有很多研究表明，可以將脂類物質(zhì)作為前列腺癌和肺癌的診斷和治療的標(biāo)志物。
綜上所述，外泌體不僅可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，也可以作為治療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療，是液態(tài)活檢領(lǐng)域“三駕馬車”之一。

目前翌圣生物公司提供的細(xì)胞上清/血清血漿外泌體提取試劑盒（貨號:41201ES25和41202ES）可以快速從細(xì)胞培養(yǎng)上清中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應(yīng)用。除此之外，還提供了高效且方便的外泌體鑒定試劑盒（貨號：41203ES），適用于人、大鼠、小鼠外泌體的鑒定。

在進(jìn)行外泌體功能研究過程中，一般需要經(jīng)過外泌體提取、純化、鑒定、染色、測序等一系列的過程，提取的外泌體的量的多少，以及純度的高低是實(shí)驗成功與否的關(guān)鍵，下面將介紹一下外泌體提取過程中需要注意的細(xì)節(jié)。

1. 不同樣本提取外泌體參考體積？

2. 外泌體血液樣本提取需注意事項？

全血經(jīng)過長時間放置，冷凍、離心、會發(fā)生溶血現(xiàn)象，無法提取外泌體，必須做好血清血漿的分離，以去除血清外源的外泌體。

3.如何去除血清外源的外泌體。

a.將細(xì)胞培養(yǎng)用的血清通過1×105g超速離心10h，去除血清外泌體；b. 選擇無血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

4.細(xì)胞上清外泌體提取試劑盒（貨號：41202）可以提取哪些樣本的外泌體？

細(xì)胞上清液、尿液（可直接提?。?、腦脊液（需處理后再提?。?。其他的組織液包括體液、唾液、卵泡液、精液等提取效率較低，建議客戶用專門的組織液提取試劑盒。

5.如何提取組織細(xì)胞外泌體？

無菌環(huán)境下將組織剪成小塊（越小越好），然后在無血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h；將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以3000g離心20 min去除培養(yǎng)液中雜質(zhì)和細(xì)胞碎片，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中；先使用0.45μm濾器過濾上清液，接著使用0.2μm濾器過濾上清液，再按照說明書提取外泌體。

6.外泌體如何保存？

純化后的外泌體可于 4℃保存不超過一周，-80℃條件下可長期保存，避免反復(fù)凍融。

【1】Crouser E D, Hamzeh N Y, Maier L A, et al. Exosomal microRNA for detection of cardiac sarcoidosis[J]. American journal of respiratory and critical care medicine, 2017, 196(7): 931-934.

【2】Selmaj I , Cichalewska M , Namiecinska M , et al. Global exosome transcriptome profiling reveals biomarkers for multiple sclerosis[J]. Annals of Neurology, 2017, 81(5).

【3】Chi Lam Au Yeung, Ngai-Na Co1, Tetsushi Tsuruga1, et al. Exosomal transfer of stroma-derived miR21 confers paclitaxel resistance in ovarian cancer cells through targeting APAF1.NATURE COMMUNICATIONS. 2016.

【4】Ling-Yun Lin, Li Yang, Qiang Zeng, et al. Tumor-originated exosomal lncUEGC1 as a circulating biomarker for early-stage gastric cancer. Molecular Cancer (2018) 17:84.

【5】Wang G,Liu W,et al.Three isoforms of exosomal circPTGR1 promote hepatocellular carcinoma metastasis via the miR449a-MET pathway.EBioMedicine,2019.

【6】Zhu L, Li J, Gong Y, Wu Q, Tan S, Sun D, Xu X, Zuo Y, Zhao Y, WeiYQ, Wei XW, Peng Y. Exosomal tRNA-derived small RNA as a promising biomarker for cancer diagnosis. Mol Cancer. 2019 Apr 2;18(1):74.

【7】Poggio,M.,Hu,T.Y.,Pai,C.C.,Chu.B.,Belair,C.D.,Chang,A.,  Montabana,E.,Lang,U.E., Fu,Q., Fong, L., Blelloch, R.(2019).Suppression of Exosomal PD-L1 Induces Systemic Anti-tumor Immunity and Memory.Cell 177,414-427.

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