產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
Exosome（外泌體）是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細胞與細胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。
本試劑盒采用獨特的分離技術，可以快速從細胞培養(yǎng)上清中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應用。
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
41201ES25 |
41201ES50 |
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41201-A |
Exosome isolation solution (Cell Culture Media) |
25 mL |
50 mL |
儲存條件
室溫運輸，本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個月。
使用說明
1.樣品制備：
收集細胞培養(yǎng)基至15 mL離心管中，3000×g，離心10 min；小心收集上清，并轉(zhuǎn)移至新的離心管中（勿破壞沉淀），于冰上放置待用。
【注】若收集的細胞上清不能及時使用，可先放置于-20℃或-80℃冷凍。使用時，于25℃水浴鍋中解凍，完全溶解后置于冰上待用。
2.外泌體分離：
1）試劑準備：使用前請將外泌體抽提試劑充分混勻。
2）上清預處理：吸取10 mL細胞培養(yǎng)上清，加入2.5 mL外泌體抽提試劑（41201-A），渦旋振蕩混勻1 min，再放置于2℃至8℃靜置8 h以上（注：增加靜置時間可提高外泌體得率，但不可超過24 h）。
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細胞培養(yǎng)上清 |
外泌體抽提試劑 |
用途 |
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10 mL |
2.5 mL |
電鏡、NTA粒徑、Western Blot |
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40 mL |
10 mL |
多基因核酸分析（qPCR）、測序 |
【注】上述用量的推薦，僅針對外泌體分泌量高的腫瘤細胞，對于外泌體分泌量少的樣品（例如干細胞）可以適當加大上清的用量。其它規(guī)格的細胞上清可以根據(jù)外泌體抽提試劑的用量進行等比例換算。
- 外泌體沉淀：取出裝有混合液的離心管于4℃，10,000×g離心60 min，棄上清，收集沉淀（盡可能吸盡上清）。
- 再次沉淀：將含有沉淀的離心管再次于4℃，10,000×g離心2 min，棄上清，收集沉淀（盡可能吸盡上清液）。
- 外泌體重懸：取100 μL 1×PBS均勻吹打離心沉淀物，使其充分混勻，并轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中；
【注】外泌體顆粒會附著在管壁上，重懸時可以使用PBS對管壁進行反復吹打洗脫（避免劇烈吹打）。重懸用的PBS的量可以根據(jù)細胞上清的量進行等比例增加，也可以根據(jù)可能獲得的外泌體的量進行適當?shù)脑黾踊蛘邷p少。
- 外泌體的洗滌：將含有外泌體的1.5mL離心管于4℃，12,000×g離心2 min，棄沉淀，保留上清液。
- 外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天，-80℃ 長期保存，避免反復凍融。
外泌體濃縮（可選）：
如果獲得的外泌體濃度比較低，可以使用密理博3kD孔徑的超濾管于4℃，14000×g離心10-30 min，內(nèi)管中即為純化后的外泌體顆粒。
外泌體除菌（可選）：
獲得的外泌體后期需要與細胞共培養(yǎng)，可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時，建議外泌體蛋白濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索，選擇一個較為合適的條件。
注意事項
1．為了確保獲得的外泌體是來自于您的細胞，最好使用無外泌體的血清進行培養(yǎng)。
2．如果想要進一步純化外泌體，可以使用相應抗體包被的磁珠進行親和純化。
3．產(chǎn)品只針對細胞培養(yǎng)上清來源的外泌體分離，不適用血清/血漿中外泌體的抽提，如果需要進行血清/血漿的外泌體分離，請選用血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒。
4．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5．本產(chǎn)品僅作科研用途！
Ver.CN20230920
