在診斷或研究由病原感染引起的疾病時(shí)，僅依靠檢測病原基因組核酸的檢測結(jié)果只能確認(rèn)病毒的存在，而不足以反映病毒是否有持續(xù)感染或整合入宿主基因組的風(fēng)險(xiǎn)。以人乳頭瘤病毒（HPV）為例，其DNA的檢出可能只是指示一次性感染，并不直接代表持續(xù)的病變或癌變風(fēng)險(xiǎn)。

相反，檢測HPV E6/E7 mRNA的水平能提供更精確的信息，評估HPV病毒在宿主體內(nèi)的基因組整合情況、轉(zhuǎn)錄活性以及持續(xù)感染和致癌的可能性。這種檢測方法更專注于“病變”而非僅僅是“感染”，在確保識別可能進(jìn)展為浸潤癌的癌前病變的同時(shí)，避免了對一次性HPV感染及其相應(yīng)良性病變的過度探查和不必要的治療。

圖1. HPV病毒感染宮頸細(xì)胞示意圖^[2]

為確?；騧RNA表達(dá)量分析的準(zhǔn)確性，必須排除樣本中g(shù)DNA的干擾，因?yàn)槠浯嬖诳赡軐?dǎo)致mRNA定量結(jié)果的誤差。實(shí)現(xiàn)mRNA樣本中g(shù)DNA的有效消除一直是一個(gè)突出的技術(shù)挑戰(zhàn)。在這一背景下，脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I, DNase I）作為一種主要用于降解DNA的酶，被廣泛采用以解決這一問題。

DNase I是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA的非特異性核酸內(nèi)切酶。它能夠水解磷酸二酯鍵，產(chǎn)生含有5'-磷酸基團(tuán)和3'-OH基團(tuán)的單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。DNase I最佳的工作pH范圍是7-8，其活性依賴于Ca²⁺，并可被二價(jià)金屬離子如Mn²⁺，Mg²⁺，Zn²⁺等激活。在Mg²⁺存在條件下，DNase I 隨機(jī)剪切雙鏈DNA的任意位點(diǎn)；Mn²⁺存在條件下，DNase I可在同一位點(diǎn)剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個(gè)核苷酸突出的粘末端。

圖2. DNase I在Mg²⁺以及Mn²⁺存在下可切割dsDNA原理圖

常見的DNase I主要從牛胰腺中純化或?yàn)橹亟M酶。翌圣DNase I由ZymeEditor™酶改造平臺重組表達(dá)而來，無RNase殘留，酶切效率高，作用底物類型廣，更適合對RNase敏感的應(yīng)用。

數(shù)據(jù)展示：翌圣DNase I可特異性去除DNA，對RNA無影響

分別使用翌圣及進(jìn)口品牌T*、N*的DNase I進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄中DNA模板去除，結(jié)果顯示翌圣DNase I的模板DNA去除效率與國際進(jìn)口品牌相當(dāng)。

圖3. 體外轉(zhuǎn)錄中模板DNA去除 C：不加DNase I對照；T*：進(jìn)口品牌T*；N*：進(jìn)口品牌N*；M：Marker

翌圣DNase I 選擇指南

為滿足不同的應(yīng)用需求，翌圣可提供牛胰腺提取來源及E. coli重組表達(dá)兩種來源的DNase I，并可提供GMP級別DNase I，以滿足mRNA體外轉(zhuǎn)錄等應(yīng)用。

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