胰蛋白酶(Trypsin, EC3.4.21.4)，又稱胰酶，是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸蛋白水解酶，在脊椎動物中作為消化酶而起作用。胰酶是由223個氨基酸組成的單鏈多肽，包括兩個亞基，α亞基（有2個多肽鏈構(gòu)成）和β亞基（有1個多肽鏈構(gòu)成），特異性切割帶正電荷賴氨酸和精氨酸羧基端，但當(dāng)這兩個氨基酸緊連脯氨酸或切割位點任一邊緊鄰酸性殘基時，會減緩胰酶水解速率。

圖1 胰蛋白酶分子結(jié)構(gòu)式(CAS NO. 9002-07-7)
 

由于胰酶可以作用跨膜蛋白和胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)，如：鈣粘素、整聯(lián)蛋白等，膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白等，故胰酶現(xiàn)常用于解離組織和單層細(xì)胞。雖然胰蛋白酶能使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散，但不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的反應(yīng)是不一樣的，分散細(xì)胞的活性還與胰酶濃度、反應(yīng)溫度和時間有關(guān)。在pH條件為7-9、溫度為37℃的條件下是胰酶分散細(xì)胞的作用能力最強，將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和Ca2⁺和Mg2⁺以防止其抑制胰蛋白酶活性。此外，胰酶水解活性可被多種抑制劑抑制，包括：1）有機(jī)磷化合物，如氟磷酸異丙酯；2）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制劑；3）銀離子；4）特定蛋白酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等。
 

胰酶應(yīng)用于貼壁細(xì)胞

實驗過程

1、移除細(xì)胞培養(yǎng)液，用不含Ca2⁺和Mg2⁺的無菌PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液潤洗貼壁細(xì)胞，去除殘余血清；

2、加入適量胰蛋白酶溶液至完全覆蓋細(xì)胞，室溫孵育幾分鐘，不同的細(xì)胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長消化時間。不同的細(xì)胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長消化時間。

3、細(xì)胞顯微鏡下觀察，有明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化，加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化。注意避免過度消化，防止胰酶對細(xì)胞造成的損傷。

4、輕輕反復(fù)吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)板底盡可能吹離，收集至無菌離心管；

5、室溫500 g離心5min后收集沉淀細(xì)胞進(jìn)行下一步操作或?qū)⒓?xì)胞凍存；
 

注意事項

1、使用胰酶時應(yīng)把握好濃度、溫度和時間，以免因消化過度對細(xì)胞造成損傷。

2、配置胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2⁺和Mg2⁺的HBSS，以免降低胰酶的活性。

3、建議用含有血清培養(yǎng)液來終止胰酶對細(xì)胞消化作用。

4、胰酶溶液不宜4℃長期保存，切忌反復(fù)凍融，建議分裝凍存。
 

Yeasen推出系列胰酶產(chǎn)品，經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過豬細(xì)小病毒和支原體實驗測試

可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化，不同批次性能穩(wěn)定！
 

 

圖2 Yeasen胰蛋白酶產(chǎn)品
 

相關(guān)產(chǎn)品推薦
 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
Trypsin, 1:250 胰蛋白酶1:250	40101ES25	25 g
Trypsin  (0.25%), phenol red 胰酶溶液(0.25%)，含酚紅	40126ES60	100 mL
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red 胰酶-EDTA溶液(0.25%)，含酚紅	40127ES60	100 mL
EDTA, Free Acid 乙二胺四乙酸	60126ES02	500 g

 

客戶使用該產(chǎn)品發(fā)表的科研文獻(xiàn)（不完全統(tǒng)計：部分）

1、Fu J, et al. Photoelectric-Responsive Extracellular Matrix for Bone Engineering. ACS Nano. 2019 Nov 26;13(11):13581-13594. IF: 14.588

2、Yuan T, et al. Lactobacillus murinus Improved the Bioavailability of Orally Administered Glycyrrhizic Acid in Rats. Front Microbiol. 2020 Apr 24;11:597. IF: 4.235

3、Jia M, et al. PTEN promotes apoptosis of H2O2?injured rat nasal epithelial cells through PI3K/Akt and other pathways. Mol Med Rep. 2018 Jan;17(1):571-579. IF: 2.1

4、Liu Y, et al. Preparation of mixed micelles carrying folates and stable radicals through PLA stereocomplexation for drug delivery. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2020 Mar;108:110464. IF: 5.88