細(xì)胞染色和示蹤試劑是跟蹤復(fù)雜環(huán)境中細(xì)胞的重要工具，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞遷移、創(chuàng)傷愈合及干細(xì)胞分化研究。細(xì)胞示蹤需要專門的探針染料，必須要對(duì)活細(xì)胞無毒性，還要同時(shí)具有多種熒光顏色可供選擇，以便與不同的儀器激光波長(zhǎng)和濾光片匹配，并能與抗體標(biāo)記或其他細(xì)胞分析標(biāo)記探針共染色。
常用的細(xì)胞示蹤染料有以下幾種：
① CMFDA
CMFDA 的英文全稱是5-chloromethylfluorescein diacetate，是一種可自由透過活細(xì)胞膜對(duì)細(xì)胞進(jìn)行示蹤的熒光染料。
CMFDA是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）的氯甲基衍生物，具細(xì)胞膜滲透性，不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動(dòng)運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，CMFDA中的親脂性基團(tuán)可被胞漿內(nèi)非特異性酯酶水解，生成5-氯甲基熒光素（5-chloromethylfluorescein）；5-氯甲基熒光素可發(fā)出綠色熒光， 因帶電荷而不能自由穿透細(xì)胞膜，并利用自身氯甲基與細(xì)胞內(nèi)蛋白和多肽中的谷胱甘肽在谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶作用下生成加合物，能完好的保留在胞內(nèi)。經(jīng)CMFDA標(biāo)記的細(xì)胞，熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)天（至少3天），因此非常適用于細(xì)胞分化和形態(tài)發(fā)生等研究。與常用的鈣黃綠素和FDA相比，具有較長(zhǎng)時(shí)間的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)保留特點(diǎn)。
在細(xì)胞分裂增殖過程中，CMFDA標(biāo)記熒光可分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能（有極少情況下通過細(xì)胞間縫隙連接發(fā)生染色）。同時(shí)，CMFDA標(biāo)記熒光還主要用于分析細(xì)胞間融合、細(xì)胞粘附及多藥耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究。此外，CMFDA還可用于與其他細(xì)胞示蹤染料聯(lián)合選擇性標(biāo)記感染細(xì)胞內(nèi)的病原菌；與膜不通透性核熒光探針共同使用，可用于細(xì)胞活性研究。
客戶實(shí)例：
CMFDA標(biāo)記的人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞粘付在對(duì)齊纖維基質(zhì)上，纖維硬度增加的原理圖和熒光圖像。
標(biāo)記類型：huaSMCs（即人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞）
標(biāo)尺: 200μm
引文出處：Bingcheng Yi, Yanbing Shen, Han Tang, Xianliu Wang, Bin Li, and Yanzhong Zhang. Stiffffness of Aligned Fibers Regulates the Phenotypic Expression of Vascular Smooth Muscle Cells. ACS Appl. Mater. Interfaces 2019, 11, 6867−6880
② CM-Dil
CM-Dil是DiI的一種衍生物，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞，適合監(jiān)測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)以及細(xì)胞定位分析。因具有良好的染料維持性，可用以追蹤多次傳代細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)特性。其有著強(qiáng)而穩(wěn)定的紅色熒光（Ex/Em=553/570nm），與綠色熒光染料以及蛋白具有良好的熒光分辨性，適合做多重指標(biāo)染色。CM-Dil可自由穿透質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞，從而產(chǎn)生不具有膜滲透性的反應(yīng)產(chǎn)物。經(jīng)過幾次傳代此染料還可完好的維持在活細(xì)胞內(nèi)，染料隨著細(xì)胞分裂傳入子代細(xì)胞內(nèi)，但不會(huì)進(jìn)入相鄰細(xì)胞。至少在72小時(shí)內(nèi)保持熒光信號(hào)（一般可傳3~6代）。工作濃度下，此染料無細(xì)胞毒性，不會(huì)影響細(xì)胞活力以及增殖能力。
與Dil相比，CM-Dil水溶性更好一些，便于懸浮細(xì)胞和固定細(xì)胞染色溶液的制備；CM-Dil攜帶的CM基團(tuán)（即氯甲基替代基團(tuán)）能與多肽及蛋白上的巰基反應(yīng)從而使該分子在醛類物質(zhì)中保持穩(wěn)定。與其他膜染料如DiI和PKH26不同，一些細(xì)胞經(jīng)CM-Dil染色后，可在后續(xù)的固定，透化和石蠟包埋處理中維持穩(wěn)定的標(biāo)記，因此特別適用于同時(shí)做細(xì)胞膜標(biāo)記以及后續(xù)的免疫組化，熒光原位雜交或者電鏡觀察的實(shí)驗(yàn)。
研究證實(shí)，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。
客戶實(shí)例：
外泌體通過CM-DiI孵化進(jìn)行熒光標(biāo)記，染料濃度為2μg / ml，37°C,孵育5分鐘隨后4°C，孵育15分鐘。在100 000g, 70分鐘,4°C超速離心移除多余的染料。標(biāo)記的外泌體(紅色)被纖維蛋白膠包裹。 共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)觀察纖維蛋白膠，Z-Stack掃描檢測(cè)分布在凝膠中的外泌體。
激光掃描共聚焦顯微鏡具有細(xì)胞“CT”功能，因此，它可以在不損傷細(xì)胞的情況下，獲得一系列光學(xué)切片圖像。選用“Z-Stack"模式，即可實(shí)現(xiàn)此項(xiàng)功能。
標(biāo)記類型：外泌體
標(biāo)尺: 400μm
引文出處：Jiafu Mu, Jiahe Wu, Jian Cao , Teng Ma, Liming Li , Shiqing Feng，Jianqing Gao.Rapid and effective treatment of traumatic spinal cord injury using stem cell derived exosomes.Asian Journal of Pharmaceutical Sciences 16 (2021) 806–815
③ CFDA, SE
CFDA, SE的英文全稱是Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞示蹤染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)，還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。
CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）的衍生物，具細(xì)胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動(dòng)運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光，不能穿透細(xì)胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，同時(shí)過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動(dòng)擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)月，因此非常適用于細(xì)胞群落分析。
CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀（FL1通道）根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次（1/2的熒光強(qiáng)度），二次（1/4的熒光強(qiáng)度），三次（1/8的熒光強(qiáng)度），以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。CFDA, SE可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可用于成纖維細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測(cè)。
CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。
客戶實(shí)例：
人羊膜上皮細(xì)胞在體內(nèi)遷移至損傷的子宮。 用CFSE對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記后移植到小鼠體內(nèi)。 綠色熒光染色表達(dá)率為100%。
標(biāo)記類型：hAECs（即人羊膜上皮細(xì)胞）
標(biāo)尺: 100μm
在人羊膜上皮細(xì)胞移植到損傷的子宮中3天后，免疫染色顯示出CFSE標(biāo)記的人羊膜上皮細(xì)胞(箭頭所示)，而未進(jìn)行人羊膜上皮細(xì)胞移植的宮腔粘連小鼠未檢測(cè)到熒光染色的人羊膜上皮細(xì)胞。
標(biāo)記類型：hAECs（即人羊膜上皮細(xì)胞）
標(biāo)尺: 200μm
引文出處：Boning Li , Qiuwan Zhang, Junyan Sun and Dongmei Lai.Human amniotic epithelial cells improve fertility in an intrauterine adhesion mouse model. Stem Cell Research & Therapy (2019) 10:257
④ CellTrace™ Red CMTPX 細(xì)胞質(zhì)紅色熒光探針
CellTrace™ Red CMTPX細(xì)胞質(zhì)紅色熒光探針可以輕易穿透活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)變成不具細(xì)胞滲透性的反應(yīng)產(chǎn)物，發(fā)出較強(qiáng)熒光信號(hào)。隨著細(xì)胞的傳代增殖，該染料會(huì)轉(zhuǎn)移到子細(xì)胞而非群體中相鄰的細(xì)胞中，同時(shí)染料熒光信號(hào)至少可以保持72 h，該染料顯示出較理想的示蹤性能。CellTrace™ Red CMTPX染料表現(xiàn)出無毒、穩(wěn)定、熒光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，且在生理PH環(huán)境中有明亮的熒光特性。此外，染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別是Ex=577 nm和Em=602 nm，發(fā)出紅色熒光，可以很好的與發(fā)出綠色熒光蛋白GFP一起使用，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒鈾z測(cè)。
⑤ Calcein,AM 鈣黃綠素
Calcein-AM是一種對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，發(fā)綠色熒光（Ex=490 nm，Em=515 nm）。 因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如BCECF-AM和CFDA）相比，由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低，是最適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針，而且不會(huì)抑制任何的細(xì)胞功能，如增殖和淋巴球的趨化性。由于死細(xì)胞缺乏酯酶，Calcein, AM僅用于對(duì)活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測(cè)試和短期標(biāo)記。
YEASEN活細(xì)胞示蹤相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
價(jià)格（元） |
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40721ES50/60/72 |
50μg/2×50μg/5×50μg |
575.00/895.00/1565.00 |
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40718ES50/60/72 |
50μg/2×50μg/5×50μg |
425.00/815.00/1545.00 |
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40719ES50/60/74/80 |
50 μg/2×50 μg/20×50 μg/1 mg |
199.00/369.00/3287.00/2637.00 |
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40717ES50/60 |
50 μg/10×50 μg |
465.00/3725.00 |
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40715ES25 |
25mg |
1599.00 |
