聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)是分子生物學(xué)研究的核心技術(shù)，決定PCR反應(yīng)成敗的關(guān)鍵因素則是DNA聚合酶，它是PCR反應(yīng)的核心成分。目前市場(chǎng)上的DNA聚合酶種類繁多，常見(jiàn)的有：Taq，Canace，Pfu，KOD，Phusion，Klenow、Bst、Phi29、Primerstar、Tth等。那么，什么樣的片段該選擇什么樣的DNA聚合酶呢？
 

【一】選擇PCR酶的關(guān)鍵因素：
 

1、熱穩(wěn)定性：DNA聚合酶能夠耐受高溫的能力，不同的DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性差異較大，一般通過(guò)半衰期體現(xiàn)。

2、保真度：DNA聚合酶精確復(fù)制DNA模板的能力。部分DNA聚合酶具有3’-5’的核酸外切酶活性，能夠校正錯(cuò)誤堿基，保真度可通過(guò)錯(cuò)配率體現(xiàn)。

3、靈敏度：DNA聚合酶對(duì)低拷貝模板的擴(kuò)增能力，可通過(guò)檢出率體現(xiàn)。

4、特異性：DNA聚合酶在PCR過(guò)程中只擴(kuò)增目的片段的能力，常通過(guò)抗體法或配體法等方式對(duì)DNA聚合酶進(jìn)行修飾提升酶特異性。

5、擴(kuò)增速度：DNA聚合酶向DNA新鏈中摻入核苷酸的速率，高擴(kuò)增速率DNA聚合酶可加快整體實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

（圖片來(lái)源：DNA Replication-The Definitive Guide/Biology Dictionary）

 

【二】常用的DNA聚合酶及其應(yīng)用：
 

① Taq DNA聚合酶：應(yīng)用于常規(guī)PCR

Taq DNA聚合酶來(lái)源于Thermus aquaticus，熱穩(wěn)定性及擴(kuò)增效率高，擴(kuò)增速度為30-60 sec/kb，缺乏3’→5’核酸外切酶活性，無(wú)校正功能，易產(chǎn)生錯(cuò)配堿基。使用該酶擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3’末端帶A尾，可直接用于TA克隆。

② 高保真DNA聚合酶：應(yīng)用于高保真PCR，如基因克隆、點(diǎn)突變、測(cè)序及SNP分析等

高保真DNA聚合酶是一類具有3’→5’核酸外切酶活性的酶，具有校正功能，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。當(dāng)實(shí)驗(yàn)對(duì)保真度要求較高時(shí)，需選擇此類酶。常見(jiàn)的高保真酶有Pfu、KOD、Phusion、Canace等。不同的高保真酶在保真度，擴(kuò)增速度，擴(kuò)增效率等方面有所差異。

翌圣生物Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase（Cat#10153ES）基于Pfu DNA聚合酶改造而成，其保真性是Taq酶的83倍，Pfu酶的9倍，擴(kuò)增速度高達(dá)10 sec/kb，擴(kuò)增目的片段長(zhǎng)達(dá)13 kb，具有極強(qiáng)的擴(kuò)增效率和廣泛的模板適應(yīng)性，非常適合復(fù)雜模板的高保真擴(kuò)增。
 

圖2. 翌圣10153ES Hieff Canace®高保真DNA聚合酶的保真性是Taq酶的83倍，pfu酶的9倍（測(cè)序法）。
 

③ 熱啟動(dòng)DNA聚合酶：應(yīng)用于高特異性PCR擴(kuò)增，可在室溫條件下配制反應(yīng)體系

熱啟動(dòng)DNA聚合酶是一類提高PCR反應(yīng)特異性及靈敏度的酶。該類酶是通過(guò)抗體法或配體法等方式對(duì)DNA聚合酶進(jìn)行修飾而成，使得DNA聚合酶活性在預(yù)變性溫度下才被激活，可抑制低溫條件下由引物的非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。

翌圣生物Hieff Union® Hotstart High Specific Taq DNA Polymerase（Cat#10726ES）是利用雙抗體進(jìn)行雙封閉的熱啟動(dòng)DNA聚合酶，在預(yù)變性溫度下加熱30 sec封閉抗體即可完全失活，釋放出DNA聚合酶活性和核酸外切酶活性，能有效防止錯(cuò)配或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增，抑制探針降解產(chǎn)生的

熒光信號(hào)下降。

圖3. 雙封閉抗體可有效封閉Taq DNA聚合酶的外切酶活性。

 

圖4. 與T公司抗體封閉Taq 酶對(duì)比，翌圣雙封閉抗體Taq酶（10726ES）在ARMS-PCR擴(kuò)增中分型準(zhǔn)確，靈敏度更高。
 

④ 等溫?cái)U(kuò)增DNA聚合酶：應(yīng)用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，如LAMP、CPA、RCA等

等溫?cái)U(kuò)增DNA聚合酶是一類具有較強(qiáng)熱穩(wěn)定性、鏈置換活性及5’→3’聚合酶活性的酶，能在恒溫條件下快速、高效、特異性的擴(kuò)增模板，無(wú)需PCR熱變性擴(kuò)增循環(huán)。

翌圣生物全新升級(jí)Bst Plus DNA Polymerase（Cat#14402ES）具有5′→3′DNA 聚合酶活性及強(qiáng)鏈置換能力。與野生型相比，該酶的靈敏度、擴(kuò)增效率、穩(wěn)定性等方面均有大幅提高，同時(shí)增加了dUTP耐受性，可廣泛應(yīng)用于基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。

 

圖5. 與同類國(guó)外競(jìng)品N及國(guó)內(nèi)競(jìng)品T對(duì)比，翌圣14402ES的靈敏度明顯優(yōu)于國(guó)內(nèi)外競(jìng)品。
 

【三】產(chǎn)品選擇指南
 

產(chǎn)品定位	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號(hào)
磁珠法病毒核酸提?。↖類備案）	MolPure® Magnetic Swab Viral DNA/RNA Kit	18300ES
適合RT-Lamp的反轉(zhuǎn)錄酶	Hifair® III Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11111ES
適合RT-qPCR的反轉(zhuǎn)錄酶	Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11300ES
高保真DNA聚合酶	Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)	10153ES
鼠源RNase抑制劑	Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	10603ES
熱敏UDG	Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile (1 U/μL)	10303ES
熱啟動(dòng)Taq酶	Hieff Union® Hotstart High Specific Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	10726ES
高靈敏度Bst酶	Bst  Plus DNA Polymerase (40 U/μL)	14402ES
Taq酶單克隆雙封閉抗體	Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody	31303ES
高純度dNTP Mix	dNTP Mix (10 mM each)	10124ES
高純度dUTP	dUTP（100 mM）	10128ES

注：以上所有的酶都有高濃度或無(wú)甘油版形式，詳情咨詢18186211438。