（一）常用細(xì)胞膜熒光探針
 

DiI, DiO, DiD, DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)。且具有消光系數(shù)高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點。一旦進(jìn)入細(xì)胞膜后，可在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。

不同的熒光染色（DiI橙色熒光；DiO綠色熒光；DiD紅色熒光；DiR深紅色熒光）為活細(xì)胞多標(biāo)、流式分析提供了便利：

1）DiO和DiI可分別用標(biāo)準(zhǔn)的FITC濾光片和TRITC濾光片檢測。

2）DiD是DiI的衍生物，具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜，可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，這一特性使其特別適合標(biāo)記具顯著自熒光效應(yīng)的細(xì)胞或組織。

3）DiR具強(qiáng)效的近紅外光穿透細(xì)胞或組織，并在近紅外區(qū)具較低的自熒光水平，這些特性使其特適用于體內(nèi)成像或示蹤實驗。

Ø  顯微鏡檢測

(1)     DiD，DiO，DiI，DiR激發(fā)波長與發(fā)射波長：

DiD	激發(fā)波長Ex (nm)	644	發(fā)射波長Em (nm)	663
DiO	激發(fā)波長Ex (nm)	484	發(fā)射波長Em (nm)	501
DiI	激發(fā)波長Ex (nm)	549	發(fā)射波長Em (nm)	565
DiR	激發(fā)波長Ex (nm)	748	發(fā)射波長Em (nm)	780

 

(2)多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：

　a) DiI和DiO=Omega XF52，Chroma 51004;

　b) DiI和DiD=Omega XF92，Chroma 51007;

　c) DiI，DiO和DiD=Omega XF93，Chroma 61005

Ø  流式細(xì)胞儀的檢測

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。

 （二）細(xì)胞示蹤——紅色熒光探針CM-DiI 
 

CM-Dil通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的紅色熒光（激發(fā)峰553nm/發(fā)射峰570nm）。

 與Dil不同，它水溶性更好，所以對于細(xì)胞染色更為方便有效；它的CM基團(tuán)（即氯甲基替代基團(tuán)）能與多肽及蛋白上的巰基反應(yīng)從而使該分子在醛類物質(zhì)中保持穩(wěn)定，所以CM-Dil標(biāo)記細(xì)胞后再進(jìn)行固定、破膜及石蠟包埋操作都不會影響其熒光，是免疫熒光、免疫組化和原位雜交中理想的細(xì)胞熒光標(biāo)記染料。

 另外，CM-DiI 對細(xì)胞無毒，且穩(wěn)定長效，能很好地長期示蹤細(xì)胞。研究證實，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。

骨髓單核細(xì)胞CM-DiI染色圖像 (x100)

心肌冰凍切片CM-DiI染色圖像 (x100)

（三）細(xì)胞增殖示蹤——綠色熒光探針CFDA SE
 

CFDA SE的全稱為Carboxyfluorescein diAcetate, succinimidyl ester，是一種近年來被廣泛應(yīng)用的細(xì)胞增殖檢測用熒光探針，也可以用于細(xì)胞的熒光示蹤。

基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測結(jié)果完全一致，但同時可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。

CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達(dá)數(shù)個月。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會逐漸減少直至檢測不到。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞也可以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。

CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞無論在體外還是體內(nèi)都不會使鄰近細(xì)胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會從一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。

目前CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測。

 

產(chǎn)品訂購
 

 

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
40718ES50	CM-DiI 活細(xì)胞染色劑	50μg
40718ES60	CM-DiI 活細(xì)胞染色劑	2×50μg
40718ES72	CM-DiI 活細(xì)胞染色劑	5×50μg
40725ES10	DiO (DiOC18(3)) 細(xì)胞膜綠色熒光探針	10mg
40726ES10	DiI (細(xì)胞膜紅色熒光探針)	10mg
40756ES10	線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔檢測試劑盒(流式分析)	10mg
40757ES25	DiR Iodide (DiIC18(7)) DiR碘化物	25mg
40758ES25	DiD Perchlorate (DiIC18(5)), Solid Form	25mg
40715ES25	CFDA SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針	25mg
40714ES76	CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒	500T
40714ES80	CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒	1000T

 

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