隨著糖蛋白質組學和抗體藥研究的迅速發(fā)展，糖基化修飾也備受關注。細胞與細胞、細胞與病原體的接觸主要是通過糖與蛋白質相互作用完成的，糖基化決定了糖復合物的粘附特性。在IgG中，Fc區(qū)Asn297處的保守N-連接糖對其活性也至關重要。此外，一些抗體還具有額外的N-糖鏈，與 Fc區(qū) Asn297處的保守位點一起影響抗體的識別、半衰期和免疫反應。

蛋白質糖基化是一種復雜的翻譯后修飾，涉及糖鏈在蛋白質特定位點的連接，依據糖鏈類型的差異，糖蛋白被分為N-連接糖蛋白、O-連接糖蛋白等；另外，蛋白質糖基化還受到宿主細胞類型和發(fā)酵條件（如培養(yǎng)基、pH值、溫度等）波動的影響。因此，糖蛋白在糖基化模式上通常具有異質性，包括糖基化位點、糖基化程度以及糖鏈的具體結構，使得糖鏈分析和結構表征工作極具挑戰(zhàn)，為了最大程度上獲得糖鏈結構信息，目前糖鏈分析的主要策略是先把糖鏈從蛋白上游離下來，然后進行詳細的分析表征。在此策略中，高效、準確、穩(wěn)定的去糖基化方法至關重要。

酶促法是目前應用比較廣泛的去糖基化方法。對N-連接糖，常被使用的酶是PNGase F (N-糖苷酶F)、Endo H (糖苷內切酶H)、Endo S(糖苷內切酶S )等。

PNGase F (N-糖苷酶 F)是去除糖蛋白中幾乎所有N-連接寡糖的最有效的酶促方法，可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復雜的寡糖糖蛋白，特異性除去N-連接糖。切割位點為：最內側N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺殘基之間的酰胺鍵，同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉化為天冬氨酸。當α1-6巖藻糖位于GlcNAc核心時，PNGase F也可以切割；只有當α1-3巖藻糖位于GlcNAc核心時（常見于植物和昆蟲糖蛋白），PNGase F不能切割。

我司目前可提供Fast PNGase F, N-糖苷酶 F（快速版）（Cat#20406ES, 可以在數分鐘內對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進行徹底和快速的去糖基化），儲存緩沖液中含甘油的PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)（Cat#20407ES）、PNGase F, N-糖苷酶 F (750000 U/mL)（Cat#20415ES），儲存緩沖液中無甘油的PNGase F（Glycerol-free）, N-糖苷酶 F (無甘油，100000 U/mL)（Cat#20405ES）。

Endo H (糖苷內切酶H) 是一種重組糖苷酶，能夠對 N-糖蛋白中的高甘露糖和某些雜合型寡聚糖的殼二糖核心結構進行切割，去除糖蛋白中的 N-連接高甘露糖。

我司目前可提供酵母重組表達的Endo H糖苷內切酶H（Cat#20414ES）。

Endo S(糖苷內切酶S )是一種高度特異性糖苷內切酶，可以從野生型IgG重鏈的殼二糖核心結構之間切除N-連接糖。糖苷內切酶S的活性對多肽沒有嚴格的要求，因此X可以是蛋白質、肽、天門冬酰胺或游離聚糖。無論底物上有沒有核心α1-6巖藻糖或平分型N-乙酰葡糖胺，糖苷內切酶S都有活性。但對于具有三、四個支鏈唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，糖苷內切酶S沒有活性。

我司目前可提供大腸桿菌重組表達的Endo S糖苷內切酶S（Cat#20413ES）。

表1.翌圣糖苷酶系列產品選購指南

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