Streptavidin鏈霉親和素-抗生物素蛋白的替代品
一 背景介紹
鏈霉親和素是一種來源于阿維丁鏈霉菌（streptomyces avidinii）的生物素結(jié)合蛋白質(zhì)，其非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低，且與蛋清親和素在中性pH值具有凈正電荷和包含大約7%的碳水化合物相比，鏈霉親和素蛋白具有在中性pH值幾乎沒有凈電荷，不含有碳水化合物等更有利的化學(xué)性質(zhì)，所以它被廣泛用來作為抗生物素蛋白的替代品。
二 產(chǎn)品特點(diǎn)
? 四聚體結(jié)構(gòu)：鏈霉親和素同源四聚體的形式存在，大小為66Kda；
? 親和力強(qiáng)：每分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合，兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈；
? 用途廣：鏈霉親和素-生物素復(fù)合物的解離常數(shù)處于 10 mol/L 數(shù)量級(jí)，這一性質(zhì)常用于分子生物學(xué)用途；在大多數(shù)應(yīng)用中，可以與抗生素蛋白抗體相互替代。
? 優(yōu)質(zhì)提?。?/strong>由streptomyces avidinii菌提純獲得；
圖1鏈霉親和素
三 產(chǎn)品應(yīng)用
應(yīng)用一 鏈霉親和素純化樹脂
1 應(yīng)用原理
基于鏈霉親和素與生物素之間的相互作用，將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上，獨(dú)特的制備工藝使其具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。
圖2 鏈霉親和素樹脂的純化原理
2 Yeasen致力于為您提供效率高的產(chǎn)品，為您純化得到更完美的蛋白。
圖3 鏈霉親和素樹脂純化后的蛋白
3 常見問題
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問題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過高 |
填料被堵塞 |
清洗樹脂。 |
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裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，或離心去除。 |
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樣品太黏稠 |
樣品中含高濃度的核酸，延長破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5µg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min |
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緩沖液太黏稠 |
有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速。 |
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洗脫組分中無目的蛋白 |
過度的裂解使目的蛋白變性 |
使用溫和的裂解條件，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。 |
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目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 |
在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10 mM |
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目的蛋白沒有完全洗脫下來 |
洗脫體積太少 |
增加洗脫液體積，減小洗脫流速。 |
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洗脫液中鹽酸胍的pH 發(fā)生改變 |
使用新鮮配制的洗脫液 |
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洗脫液孵育時(shí)間不夠 |
增加洗脫液與凝膠的孵育時(shí)間 |
應(yīng)用二 熒光基團(tuán)及酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素
圖4 不同標(biāo)記的鏈霉親和素
1 酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素
辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈和親霉素
1) 由高純度的鏈霉親和素和辣根過氧化物酶，通過特殊的偶聯(lián)技術(shù)生產(chǎn)；
2) 保持了過氧化物酶的高比活性。
應(yīng)用于：免疫組化（IHC）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、原位雜交（ISH）等領(lǐng)域。
推薦使用濃度：0.01-0.1 µg/mL for WB（化學(xué)發(fā)光法）；1-2µg/mL for ELISA，HC/ICC，WB(底物顯色）
堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉親和素
1) 適合于固相分析，組織/細(xì)胞染色系統(tǒng)和印跡應(yīng)用，選擇特定的共價(jià)連接；
2) 綴合物穩(wěn)定并高活性。
應(yīng)用于：免疫組化（IHC）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISPOT）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、原位雜交（ISH）及印跡應(yīng)用。
推薦使用濃度：1-2 µg/mL for ELISA， IHC/ICC；0.1-1 µg/mL for WB
2 熒光基團(tuán)標(biāo)記的鏈霉親和素
Fluor®熒光素標(biāo)記鏈霉親和素
1) 推薦用于常規(guī)免疫熒光；
2) 高度純化并具有非常低的非特異性結(jié)合特性；
3) 對(duì)生物素具有較高的親和力；
應(yīng)用于：免疫熒光（IF）、原位雜交（ISH）、流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cyt）。
推薦使用濃度：0.5-2 µg/mL（IF）
DyLight™ 染料標(biāo)記鏈霉親和素
1) 在免疫熒光、原位雜交或流式細(xì)胞術(shù)等應(yīng)用中可用于檢測生物素化的二抗和其他大分子；
2) 高度純化并具有非常低的非特異性結(jié)合特性；
3) 對(duì)生物素具有極高的親和力；
4) 高光穩(wěn)定性、pH不敏和更亮的熒光；
應(yīng)用于：免疫熒光（IF）、原位雜交（ISH）、流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cyt）。
推薦使用濃度：0.5-2 µg/mL（IF）
四 產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品系列 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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鏈霉親和素 |
規(guī)?；a(chǎn)，單批次過100g |
35100ES03 |
1mg |
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35100ES08 |
5mg |
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35100ES10 |
10mg |
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35100ES60 |
100mg |
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35100ES80 |
1g |
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35101ES03 |
1 mg |
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35101ES08 |
5 mg |
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35101ES10 |
10 mg |
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35101ES60 |
100mg |
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35101ES80 |
1g |
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酶偶聯(lián)物標(biāo)記的鏈霉親和素 |
35105ES60 |
100 µL |
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35106ES60 |
100 µL |
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熒光基團(tuán)標(biāo)記的鏈霉親和素 |
35102ES60 |
100 µL |
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35103ES60 |
100 µL |
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35104ES60 |
100 µL |
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35107ES60 |
100 µL |
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35108ES80 |
1 mg |
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鏈霉親和素純化系列 |
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20512ES08 |
5 mL |
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20512ES25 |
5 mL×5 |
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20512ES60 |
100 mL |
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20513ES03 |
1 mL |
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20513ES08 |
1 mL×5 |
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20514ES08 |
5 mL |
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20514ES25 |
5 mL×5 |
