產(chǎn)品描述

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一種生物素或生物素化的蛋白、抗體等物質(zhì)的純化樹脂，其作用原理是基于鏈霉親和素與生物之間的相互作用，將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上，獨特的制備工藝使其具有更高的物理化學特性，可以耐受更高的壓力，在相對較高的流速下，實現(xiàn)對目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

由于鏈霉親和素與生物之間的親和力很強，純化時需要在變性條件下洗脫；而鏈霉親和素對亞氨基生物素的親和力相對較弱，可以在 pH 9.5-11.0 結(jié)合，pH 4.0 時洗脫，不需要使用變性劑，所以能更好的保持親和素偶聯(lián)物的活性。

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML是裝填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一種中壓預裝柱，規(guī)格5 mL，預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA 等，方便客戶操作。

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產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)（Matrix）	高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球
配體（Ligand）	鏈霉親和素
粒徑（Bead   size）	45-165 µm
載量（Capacity）	>200 nmol Biotin/mL介質(zhì)
最大壓力（PressureMax）	0.3 MPa，3 bar
pH穩(wěn)定范圍（pH   range）	2-10
儲存緩沖液（Buffer）	20%乙醇

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃保存，有效期2年。

 

需準備試劑

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。

生物素或生物素化物質(zhì)的純化

結(jié)合/洗雜緩沖液：150 mM NaCl，20 mM NaH2PO4，pH 7.4

洗脫緩沖液：8 M鹽酸胍，pH 1.5

亞氨基生物素標簽物質(zhì)的純化

結(jié)合/洗雜緩沖液：50 mM碳酸銨，0.5 M NaCl，pH 10.0

洗脫緩沖液：50 mM碳酸銨，0.5 M NaCl，pH 4.0

使用方法

注：樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。另外，確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結(jié)合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結(jié)合/洗滌緩沖液透析。

1.樣品純化（以ÄKTA為例）

1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。

3）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1-5 mL/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
注：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測。
6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?。也可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結(jié)合強度的蛋白質(zhì)。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。

 

2 .SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。
【注】由于鹽酸胍的帶電性強，會中和SDS的電荷，影響后面蛋白在上樣緩沖液里的帶電性能，電泳時產(chǎn)生沉淀，導致無法電泳。因此后續(xù)可以對樣本進行透析或者鹽析（透析可利用透析袋，PBS作為透析液，透析兩次，每次1小時，透析液的體積可控制在樣本的100倍）。

 

3 .填料清洗

隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會造成流速和結(jié)合載量性能下降，此時需對填料進行清洗。

1）去除一些沉淀或變形物質(zhì)

用2倍柱體積的0.1 M NaOH或6 M鹽酸胍或8 M尿素溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

注意事項

1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

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HB200817