產(chǎn)品描述

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一種生物素或生物素化的蛋白、抗體等物質(zhì)的純化樹脂，其作用原理是基于鏈霉親和素與生物素之間的相互作用，將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上，獨特的制備工藝使其具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對較高的流速下，實現(xiàn)對目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

由于鏈霉親和素與生物之間的親和力很強，純化時需要在變性條件下洗脫；而鏈霉親和素對亞氨基生物素的親和力相對較弱，可以在 pH 9.5-11.0 結(jié)合，pH 4.0 時洗脫，不需要使用變性劑，所以能更好的保持親和素偶聯(lián)物的活性。

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產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)（Matrix）	高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球
配體（Ligand）	鏈霉親和素
粒徑（Bead size）	45-165 µm
載量（Capacity）	＞200 nmol   Biotin/mL介質(zhì)
最大壓力（PressureMax）	0.3 MPa，3 bar
pH穩(wěn)定范圍（pH   range）	2-10
儲存緩沖液（Buffer）	20%乙醇

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃保存，有效期2年。

 

需準(zhǔn)備試劑

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。

生物素或生物素化物質(zhì)的純化

結(jié)合/洗雜緩沖液：150 mM NaCl，20 mM NaH2PO4，pH 7.4

洗脫緩沖液：8 M鹽酸胍，pH 1.5

亞氨基生物素標(biāo)簽物質(zhì)的純化

結(jié)合/洗雜緩沖液：50 mM碳酸銨，0.5 M NaCl，pH 10.0

洗脫緩沖液：50 mM碳酸銨，0.5 M NaCl，pH 4.0

 使用方法
注：樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。另外，確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結(jié)合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結(jié)合/洗滌緩沖液透析。

1. Streptavidin Agarose Resin 6FF的裝填（適用于各種中壓色譜層析柱的填裝）

1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。

2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。

3）如果使用儲液器，應(yīng)立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產(chǎn)生氣泡。

4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設(shè)定的流速下進行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的最大流速，這樣也可以得到一個很好的裝填效果。
注：在隨后的色譜程序中，不要超過最大裝柱流速的75%，當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。

5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。

6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。

7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。

8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。

2.樣品純化（以ÄKTA為例）

1）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
2）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
3）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測。
4）洗脫：使用5-10倍柱體積的洗脫緩沖液，收集洗脫液，即目的蛋白溶液。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。

2 .SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。

【注】由于鹽酸胍的帶電性強，會中和SDS的電荷，影響后面蛋白在上樣緩沖液里的帶電性能，電泳時產(chǎn)生沉淀，導(dǎo)致無法電泳。因此后續(xù)可以對樣本進行透析或者鹽析（透析可利用透析袋，PBS作為透析液，透析兩次，每次1小時，透析液的體積可控制在樣本的100倍）。

3 .填料清洗

隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會造成流速和結(jié)合載量性能下降，此時需對填料進行清洗。

1）去除一些沉淀或變形物質(zhì)

用2倍柱體積的0.1 M NaOH或6 M鹽酸胍或8 M尿素溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

注意事項

1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

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HB200817