產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
天然腔腸素（Coelenterazine native），又稱腔腸素游離酸，是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子，應(yīng)用非常廣泛，可用于檢測活細(xì)胞中鈣離子濃度，基因報告分析，BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，以及組織或細(xì)胞中ROS水平的化學(xué)發(fā)光檢測。
產(chǎn)品性質(zhì)
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英文別名（English synonym） |
Renilla luciferin;Coelenterazine free base |
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CAS號（CAS NO.） |
55779-48-1 |
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分子式（Formula） |
C26H21N3O3 |
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分子量（Molecular weight） |
423.46g/mol |
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外觀（Appearance） |
黃色固體 |
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溶解性（Solubility） |
溶于甲醇和乙醇，不溶于DMSO |
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純度（Purity）（TLC） |
>97% |
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結(jié)構(gòu)（Structure） |
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運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸；粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣；長期保存于-70℃。有效期2年。
腔腸素的溶解
對于所有進(jìn)行熒光信號檢測的試驗建議溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。建議可用乙醇或丙二醇配制成儲存液（配制濃度可參考文獻(xiàn)推薦）。在使用時需將儲存液用合適的緩沖液稀釋成工作液。
注意：1）在用蒸餾水或者PBS及其他的溶液進(jìn)行腔腸素儲存液的稀釋時需排除稀釋液中的氣泡。同時工作液最好呈弱酸性，既可以減緩腔腸素的氧化，同時也可防止沉淀的析出。但是弱酸也有可能對后續(xù)熒光強(qiáng)度RLU的檢測造成誤差。
2）腔腸素的工作液不穩(wěn)定，避免過夜保存。
注意事項
1）保存時若接觸空氣，時間過久會使得腔腸素氧化，造成實驗結(jié)果的不準(zhǔn)確性。
2）對于儲存液的制備，較穩(wěn)定的是保存于丙二醇中，同時可加入還原劑如L-抗壞血栓，β-巰基乙醇，DTT，DTE（二硫赤糖醇），或少量的鹽酸。還原劑的存在可能會破壞熒光素酶的結(jié)構(gòu)，也會影響腔腸素的氧化速率。
3）腔腸素在醇類物質(zhì)中的冰凍保存可能會導(dǎo)致沉淀的析出（和濃度有關(guān)），可通過將溶液加熱至50-60℃至其溶解。在使用前請確保眼觀無沉淀。
4）最適溶劑的選擇取決于多種因素，如還原劑。對于水母發(fā)光蛋白的檢測，可選用β-巰基乙醇，因為此還原劑能夠使水母發(fā)光蛋白更好地與腔腸素作用。但對于Gluc蛋白的檢測，由于蛋白中含有5對二硫鍵，在還原劑的存在狀態(tài)下不能夠檢測到熒光信號。
5）腔腸素在不同溶劑中的溶解特性：（單位：mg/mL）
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Solvents |
Room Temp (RT) |
60°C (heat, vortex) |
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Methanol 100% |
46 |
70 |
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Ethanol 100% |
64 |
196 |
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Propanol 100% |
82 |
204 |
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Butanol 100% |
86 |
180 |
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Propylene Glycol |
24 |
240 |
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b-Mercaptoethanol |
160 |
268 |
注：a：腔腸素的丙二醇溶液在室溫下的溶解度較低，但是在-70℃的狀態(tài)下沒有沉淀析出。
b：腔腸素在β-巰基乙醇中的溶解度在室溫和60℃時都是最高的，但能夠穩(wěn)定存在的時間還有待進(jìn)一步測試。
6）當(dāng)使用多孔板進(jìn)行熒光值的檢測時，建議通過設(shè)置對照孔來消除由于腔腸素在工作液中不斷被氧化所帶來的誤差。
7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8） 本產(chǎn)品僅作科研用途！
HB220725
