免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（無抑制劑），是一種非變性條件下裂解細(xì)胞或組織樣本從而制備蛋白樣品的裂解液，不含蛋白酶抑制劑和磷酸酯酶抑制劑，使用本裂解液時(shí)，用戶可以根據(jù)具體用途自行添加特定抑制劑或者不添加抑制劑。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP和Co-IP等實(shí)驗(yàn)。

 

產(chǎn)品信息

貨號	20119ES60
規(guī)格	100 mL

 

儲(chǔ)存條件

-25~-15℃保存，有效期1年。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。

 

使用說明

(一) 細(xì)胞樣品

1. 融解WB/IP裂解液（無抑制劑），混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM，或根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入總體效果更佳的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20123ES/20124ES）, 如檢測磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑混合物（Cat#20109ES）

2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×10⁵-1×10⁶個(gè)細(xì)胞/管，然后再裂解。因?yàn)榇髨F(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150 μL 或200 μL。

（二）組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解WB/IP裂解液（無抑制劑），混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM，或根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入總體效果更佳的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20123ES/20124ES）, 如檢測磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑混合物（Cat#20109ES）

3. 按照每20 mg組織加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

 

注意事項(xiàng)

1. 需自備PMSF或總體效果更佳的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20123ES/20124ES）、根據(jù)不同樣本專用的蛋白酶抑制劑混合物（Cat#20134ES-20138ES）, 如檢測磷酸化蛋白，還需加入磷酸酶抑制劑混合物（Cat#20109ES）
2. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
3. 用WB/IP裂解液（無抑制劑）裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（Cat#20201ES/20200ES）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20240321