RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有裂解作用。根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度不同，大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。

本品屬于裂解強(qiáng)度居中的RIPA裂解液，含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實(shí)驗(yàn)。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。-20℃保存，一年有效。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。

注意事項(xiàng)

1）需自備PMSF。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定其蛋白濃度（YEASEN CAT NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用說明：

一、細(xì)胞樣品

1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×105-1×106個(gè)細(xì)胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

二、組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。

3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

【注】RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。

 

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（強(qiáng)）	20101ES60	100 mL
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱）	20114ES60	100 mL
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中）	20115ES60	100 mL
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液	20118ES60	100 mL
NP-40 (Nonidet P 40) 乙基苯基聚乙二醇	20103ES60	100 mL
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 十二烷基硫酸鈉（molecular biology）	20106ES76	500g
Triton X-100, Molecular Biology Grade 曲拉通X-100（分子生物學(xué)級(jí)）	20107ES76	500 mL
Triton X-114, Molecular Biology Grade  曲拉通X-114（分子生物學(xué)級(jí)）	20108ES76	500 mL

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