本品細(xì)胞/組織裂解液，WB/IP裂解液，是一種非變性條件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解，并能維持原有的蛋白間的相互作用。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP和Co-IP等實(shí)驗(yàn)。

翌圣為您提供Western Blot實(shí)驗(yàn)整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購(gòu)請(qǐng)參考：WB實(shí)驗(yàn)系列產(chǎn)品-選購(gòu)指南

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。-20℃保存，一年有效。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。

注意事項(xiàng)

1）需自備PMSF。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定其蛋白濃度（YEASEN CAT NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用說(shuō)明：

(一) 細(xì)胞樣品
1. 融解WB/IP裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×10?-1×10?個(gè)細(xì)胞/管，然后再裂解。因?yàn)榇髨F(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。

3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150μl或200μl。

（二）組織樣品：

1.把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2. 融解WB/IP裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。

3.按照每20 mg組織加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

4.用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5.充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6.如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

 

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（強(qiáng)）	20101ES60	100 mL
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱）	20114ES60	100 mL
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中）	20115ES60	100 mL
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液	20118ES60	100 mL
NP-40 (Nonidet P 40) 乙基苯基聚乙二醇	20103ES60	100 mL
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 十二烷基硫酸鈉（molecular biology）	20106ES76	500 g
Triton X-100, Molecular Biology Grade 曲拉通X-100（分子生物學(xué)級(jí)）	20107ES76	500 mL
Triton X-114, Molecular Biology Grade  曲拉通X-114（分子生物學(xué)級(jí)）	20108ES76	500 mL

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