產品簡介

酪酰胺信號放大（TSA）系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細胞化學（ICC）、免疫組織化學（IHC）和原位雜交（ISH）技術中的低豐度靶點，可將信號靈敏度提高100倍。熒光標記的酪胺分子在H₂O₂的存在下被二抗標記的辣根過氧化物酶（HRP）催化激活，產生大量的酶促反應，使熒光分子在抗原-抗體結合部位與組織周圍的蛋白殘基結合，形成大量的熒光分子沉積，實現信號放大，該標記過程迅速（小于10 min），沉積標記可直接在標準或共聚焦顯微鏡下觀察。TSA試劑盒可與傳統(tǒng)染色方法結合使用用于多色成像，也可以順序進行兩個或更多個酪酰胺反應以標記一個樣品上的不同靶標，譬如本產品是使用了三種不同波長的熒光標記的酪胺分子的試劑盒。

TSA技術可用于酶綴合物和合適的生色底物的明場顯微鏡檢查，也可以與抗熒光素酶結合物組合使用。與普通實驗相比，使用TSA試劑可顯著提高信號靈敏度，同時保持穩(wěn)定的特異性和分辨率。此外，TSA試劑盒可以顯著減少一抗或探針的消耗量。

Yeasen酪酰胺信號放大（TSA）系列產品包括三款單染試劑盒（60405ES、60406ES、60407ES）和一款多重標記試劑盒（60410ES）：試劑盒60405ES熒光標記信號為fluorescein，在激發(fā)和發(fā)射波長494 nm/517 nm下顯微檢測信號；試劑盒60406ES熒光標記信號為Cyanine 3，在激發(fā)和發(fā)射波長550 nm/570 nm下顯微檢測信號；試劑盒60407ES熒光標記信號為Cyanine 5，在激發(fā)和發(fā)射波長648 nm/667 nm下顯微檢測信號；試劑盒60410ES熒光標記信號為HyperFluor 488，在激發(fā)和發(fā)射波長495 nm/519 nm下顯微檢測信號。

本試劑盒是四色熒光標記試劑盒，包含HF 633、HF 546、HF 488和DAPI四種顏色，可以實現樣本的多重標記。多重標記是在每次單色熒光標記后，使用熱修復法（如微波加熱處理）去除非共價結合的抗體后換另一種一抗、熒光素酪胺，如此往復進行。

本試劑盒可使用20 sides。

組分信息

組分編號	組分名稱	產品編號/規(guī)格	儲存條件
		60410ES03（20sides）
60410-A	HF 633 Tyramide (200×)	10 μL	-25~-15℃，避光
60410-B	HF 546 Tyramide (200×)	10 μL	-25~-15℃，避光
60410-C	HF 488 Tyramide (200×)	10 μL	-25~-15℃，避光
60410-D	DAPI Solution	2 X 1 mL	-25~-15℃，避光
60410-E	HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Antibody, 1 mg/mL	30 μL	-25~-15℃，避光
60410-F	HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) Antibody, 1 mg/mL	30 μL	-25~-15℃，避光
60410-G	1× Tyramide Amplification Buffer	6 mL	-25~-15℃，避光
60410-H	BSA	200 mg	-25~-15℃，避光
60410-I	Fluorescence Mounting Medium	400 μL	-25~-15℃，避光

 

儲存條件

-25~-15℃避光保存，有效期6個月。

 

使用說明（僅供參考）

一. 自備試劑

(1) 1× PBS（Cat#41403ES）/1×D-PBS（Cat#60152ES）

(2) 4%多聚甲醛固定液（Cat#60536ES）

(3) Triton X-100（Cat#20107ES）

(4) 改進型檸檬酸鈉抗原修復液(50X)（Cat#36319ES）

(5) 封閉緩沖液：可將200 mg BSA（60410-H / Cat# 36101ES）溶于20 mL PBS中配置成封閉緩沖液，根據需求量按比例進行配置。

二. 樣本處理（適用于細胞和組織染色）

1. 細胞樣本

(1) 細胞清洗：1×PBS清洗細胞兩次。

(2) 細胞固定：加入適量4%多聚甲醛固定液固定，室溫放置20 min。

(3) 細胞清洗：1×PBS清洗細胞兩次。

(4) 通透細胞：用配制于PBS中的0.1% Triton X-100溶液通透，室溫放置5 min，可根據實際情況調整Triton X-100濃度和通透時間。

(5) 細胞清洗：1×PBS清洗細胞兩次。

2. 冷凍組織切片樣本

(1) 組織清洗：1×PBS清洗組織兩次。

(2) 組織固定：加入適量4%多聚甲醛固定液固定，室溫放置20 min。

(3) 組織清洗：1×PBS清洗組織兩次。

(4) 通透組織：用配制于PBS中的0.5% Triton X-100溶液通透，室溫放置20 min，可根據實際情況調整Triton X-100濃度和通透時間。

(5) 組織清洗：1×PBS清洗組織兩次。

3. 石蠟組織切片

(1) 將石蠟切片放置在60℃的烘箱中30 min。

(2) 室溫下用二甲苯浸泡石蠟組織切片2次，每次5 min，以徹底脫蠟。

【注】二甲苯有毒，易揮發(fā)，請在通風櫥中操作。

(3) 室溫下，將切片樣本浸沒于無水乙醇中漂洗2次，每次5 min。

(4) 室溫下，將切片樣本按照順序依次浸沒在不同濃度梯度的乙醇（95%、90%、80%、70%）中，每種濃度各漂

洗1次，每次5 min。

(5) 室溫下，將切片浸沒于純水中漂洗1次，每次3 min，再將切片浸沒于1×PBS 中漂洗1次，每次3 min，用濾紙

小心吸干切片樣本周圍多余液體。

(6) 用鉛筆在切片樣本周圍描繪樣品輪廓，以便后續(xù)進行通透與標記。

(7) 抗原修復：將改進型檸檬酸鈉抗原修復液(50X)用微波爐加熱至沸騰，將脫完蠟及復水好的片子置于緩沖液中，間斷煮沸10 min?？乖迯秃笕〕鲇谑覝刂芯徛禍?。

【注】此過程中，玻片上組織要一直浸沒于緩沖液中，以保證組織的抗原修復效果。不同的樣本選擇不同的抗原修復方法。

(8) 1×PBS清洗兩次。

4. 內源性過氧化物酶滅活（可選）

加入3%過氧化氫覆蓋樣品并在室溫下孵育60 min，淬滅樣品的內源性過氧化物酶活性。

5. 免疫標記

(1) 封閉：用封閉緩沖液室溫封閉30-60 min。（也可以根據需求，選擇羊血清或猴血清等）

(2) 用封閉緩沖液將一抗稀釋至適當的濃度。將樣品與一抗在室溫下孵育2 h或4℃過夜。

(3) 室溫下1×PBS洗滌3次，每次5 min

(4) 在封閉緩沖液中將HRP偶連的二抗稀釋（一般5 µg/mL的終濃度對于大部分TSA實驗均適用，也可以使用濃度梯度來確定最適濃度），隨后用該溶液在室溫下孵育樣品1 h。

(5) 室溫下1×PBS洗滌3次，每次5 min。

(6) 計算所需Tyramide工作液量，使用1× Tyramide Amplification Buffer將Tyramide (200 X)按照200: 1的比例稀釋Tyramide (200 X)為1X。每個樣品通常使用100 µL Tyramide工作液，室溫下孵育5-10 min。Tyramide (200 X)的稀釋比例可以在1: 50-1: 1000內摸索調節(jié)，也可以通過濃度梯度實驗確定最合適的稀釋比例。 

【注】工作液建議現配現用，保證配置酪酰胺熒光工作液用到的H₂O₂新鮮有效，未使用完請丟棄。Tyramide染色工作液需在4℃下避光保存，最長可保存24 h。每次實驗操作結束以后，建議丟棄未用完的酪酰胺熒光工作液。

(7) 在室溫下用1×PBS洗滌3次，每次5 min。

(8) 抗體剝離：使用合適的buffer進行微波間斷加熱處理10-15 min，buffer可以使用改進型檸檬酸鈉抗原修復液(50X)（Cat#36319ES），也可以按照您的需要選擇別的buffer, 比如Tris-EDTA Buffer (10 mM Tris Base, 1mM EDTA Solution, 0.05% Tween 20, pH 9.0)。

(9) 在室溫下用1×PBS洗滌3次，每次5 min。

【注】每一輪染色結束后可通過熒光顯微鏡確認染色情況。

(10) 從封閉（步驟(1)）開始進行下一個靶標的熒光免疫。

(11) 復染: 使用適量的DAPI染色液浸沒樣本進行核染色，室溫孵育5 min。

(12) 在室溫下用1×PBS洗滌3次，每次5 min。

(13) 使用抗熒光淬滅封片劑（Fluorescence Mounting Medium）進行封片。

(14) 顯微鏡成像。

 

注意事項

1. 不同的熒光試劑盒請按照對應建議波長進行操作。

2. 與熒光二抗相比，TSA試劑盒顯示出更高的靈敏度和信號。因此，實驗時一抗的使用濃度較低，可以降低非特異性結合帶來的背景熒光，我們建議設置一抗?jié)舛忍荻纫哉业阶罴褲舛取?/font>

3. 如需考慮降低自發(fā)熒光， 可以使用自發(fā)熒光淬滅劑。

4. 較高的濃度一抗或二抗可能會導致信號過強或背景高，可以從1:50到1:1000摸索以找到最佳濃度。

5. 使用前請將產品瞬時離心，以保證產品全在管底，再進行后續(xù)實驗。

6. 1×Tyramide Amplification Buffer首次使用后，建議小量分裝，-15~-25℃保存，避免反復凍融。

7. 為了防止出現假陰性、假陽性的結果，實驗過程中需設置陰性對照和陽性對照。對于組織樣品，建議對未染色的對照（不添加抗體或酪酰胺）進行成像，確定組織是否有自發(fā)熒光，排除對背景的影響。

8. 多色標記時，依據抗原密度不同選擇不同熒光素（低密度抗原選擇強染料；高密度抗原選擇較弱染料）。標記順序對最終標記效果有一定影響，需自行摸索。

9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

10. 本產品僅用于科研用途，禁止用于人身上。 

 

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產品名稱	貨號	規(guī)格
Fluorescein TSA Fluorescence System Kit 酪酰胺信號放大試劑盒	60405ES03	1 kit
Cy3 TSA Fluorescence System Kit 酪酰胺信號放大試劑盒	60406ES03	1 kit
Cy5 TSA Fluorescence System Kit 酪酰胺信號放大試劑盒	60407ES03	1 kit
TSA Multi-colour Immunofluorescence System Kit (4-Color) 酪酰胺信號放大多重標記試劑盒（四色法）	60410ES03	1 kit

Ver.CN20240509