產(chǎn)品簡介

PBCV DNA Ligase，亦稱為SplintR連接酶、PBCV-1 DNA Ligase或Chorella病毒DNA連接酶，是一種ATP依賴的DNA連接酶，能夠高效催化與一條互補(bǔ)的RNA單鏈配對的兩條相鄰DNA單鏈的連接反應(yīng)。這兩條相鄰的DNA鏈中，提供3'羥基的被稱之為受體DNA鏈(Acceptor DNA)，提供5'磷酸的被稱之為供體DNA鏈(Donor DNA)，在這個連接過程中需要一條互補(bǔ)的RNA鏈對兩條DNA單鏈起“夾板”或“支架”的作用。PBCV DNA ligase的連接酶活性遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的 T4 DNA 連接酶，對以 RNA 為夾板的 DNA 底物（表觀 Km = 1 nM，Km值越小表示親和力越強(qiáng)）表現(xiàn)出親和力，能夠?qū)?fù)雜混合物中獨特的 RNA 種類進(jìn)行亞納摩爾級檢測，使其應(yīng)用到高靈敏RNA 檢測技術(shù)，非常適合用于許多二代測序和分子診斷等應(yīng)用中的靶標(biāo)富集流程。

 

產(chǎn)品信息

貨號	14962ES80 / 14962ES90
規(guī)格	1,250 U / 5,000 U
來源	E.coli 表達(dá)的來源于Chorella virus的 PBCV-1 DNA Ligase基因
分子量	34 KD
酶活定義	一個單位定義為在25℃，15 min內(nèi)，于1X PBCV Ligase buffer中，將2 pmol的FAM標(biāo)記的DNA:RNA雜合底物連接所需的酶量（至少達(dá)到50%的完成度）
酶保存液	10 mM Tris-HCl , 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol pH 7.4 @ 25℃
反應(yīng)條件	50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ATP, 10 mM DTT, pH7.5 @25℃
濃度	25 U/µL
純度	>95% （SDS PAGE）
失活條件	65℃，20 min

 

組分信息

組分編號	組分名稱	14962ES80	14962ES90
14962-A	PBCV DNA ligase (25 U/µL)	50 µL	200 µL
14962-B	10 x PBCV Ligase buffer	1 mL	1 mL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

1.基于探針法的microRNA等小RNA的檢測；

2.通過互補(bǔ)RNA序列進(jìn)行“夾板”固定的單鏈DNA的連接；

3.使用DNA探針進(jìn)行連接達(dá)到檢測特定RNA的目的;

4.SNP或可變剪接的檢測；

5.RASL-seq分析。

 

儲存條件 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

推薦配置應(yīng)用反應(yīng)與體系：

組分	體積
10 x PBCV Ligase buffer	2 µL
底物（Substrate）(1 µM)	2 µL
PBCV DNA ligase (25 U/µL)	1 µL
H2O	15 µL
Total	20 µL
25°C反應(yīng)15-60 min ； 65°C失活20 min

 

注意事項

1.本品在ATP濃度（10 µM - 1 mM）和pH（6.5 - 9）范圍內(nèi)都具有活性。在 Mg²⁺ > 5 mM，pH 值位于 7.5 至 8.0 的條件下，可觀察到最佳活性。較高溫度（高達(dá)37℃）和補(bǔ)充5 mM Mn²⁺ 可以增強(qiáng)該酶活性。鹽濃度超過100 mM會抑制反應(yīng)。

2.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3.本產(chǎn)品僅作科研用途。

 

Ver.CN20240513