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      Hieff? Fast T4 DNA Ligase (400 U/μL)
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
       
      


      Hieff® Fast T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建庫過程中DNA片段和接頭連接的單酶產(chǎn)品，該產(chǎn)品已經(jīng)過高通量測(cè)序驗(yàn)證，質(zhì)量優(yōu)異。本酶具有高效的連接能力，非常適合復(fù)雜結(jié)構(gòu)核酸片段的連接，比如華大平臺(tái)的Ω接頭。對(duì)于無需進(jìn)行體系調(diào)整的客戶，推薦選購Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module (Cat#12604)，其核心組分即為本品。
      
 
      


      產(chǎn)品組分
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號(hào)
      
			      		
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10299ES40
      

			
      （40000 U）
      
			      		
			
			
      10299ES42
      

			
      （400000 U）
      
			      		
			
			
      10299ES83
      

			
      （1600 KU）
      
			      		
			
			
      10299ES08
      

			
      （5 mL）
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10299-A
      
			      		
			
			
      Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL)
      
			      		
			
			
      100 µL
      
			      		
			
			
      1 mL
      
			      		
			
			
      4 mL
      
			      		
			
			
      5 mL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10299-B
      
			      		
			
			
      10 × T4 DNA Ligase Buffer
      
			      		
			
			
      250 μL
      
			      		
			
			
      5 × 500 μL
      
			      		
			
			
      10 mL
      
			      		
			
			
      12.5 mL
      
			      		
		
      
	      

      



      
單位定義
      


      在20 μL的連接反應(yīng)體系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時(shí)，催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
      



      
運(yùn)輸與保存方法
      


      冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
      



      
注意事項(xiàng)
      


      1. T4 DNA Ligase對(duì)物理變性敏感，混合時(shí)輕輕顛倒試管搖勻，請(qǐng)勿劇烈振蕩；
      


      2. 酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存；
      


      3. 本產(chǎn)品僅做科研用途；
      


      4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
      


       
      


      使用方法
      


      1. 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化，直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容，進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制，渦旋瞬離后置于20℃，反應(yīng)15 min即可。
      


      表1  Adapter Ligation體系
      


      
	
		
      
			
			
      名稱
      
			      		
			
			
      體積（μL）
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      dA-tailed DNA
      
			      		
			
			
      60
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10 × T4 DNA Ligase Buffer
      
			      		
			
			
      10
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      50% PEG 6000
      
			      		
			
			
      10*
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      DNA Adapter
      
			      		
			
			
      X**
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL)
      
			      		
			
			
      1-5***
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      ddH2O
      
			      		
			
			
      To 100
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】：*試劑盒內(nèi)未提供50% PEG 6000，需自行準(zhǔn)備。
      


      **接頭用量參考表2。
      


      ***Hieff® Fast T4 DNA Ligase用量可根據(jù)需要添加1-5 μL。
      


      2. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產(chǎn)量。Adapter用量過高可能會(huì)產(chǎn)生較多Adapter Dimer；用量較低可能會(huì)影響連接效率及文庫產(chǎn)量。表2列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
      


      表2  500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
      


      
	
		
      
			
			
      Input DNA
      
			      		
			
			
      Adapter : Input DNA摩爾比
      
			      		
			
			
      Input DNA
      
			      		
			
			
      Adapter : Input DNA摩爾比
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      1 μg
      
			      		
			
			
      10:1
      
			      		
			
			
      50 ng
      
			      		
			
			
      100:1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      500 ng
      
			      		
			
			
      20:1
      
			      		
			
			
      25 ng
      
			      		
			
			
      200:1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      250 ng
      
			      		
			
			
      40:1
      
			      		
			
			
      1 ng
      
			      		
			
			
      200:1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      100 ng
      
			      		
			
			
      100:1
      
			      		
			
			
      500 pg
      
			      		
			
			
      400:1
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。
      


      【接頭添加計(jì)算舉例】：當(dāng)Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時(shí)，接頭應(yīng)該添加多少？
      


      第一步，計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；
      


      Input DNA摩爾數(shù)（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；
      


      第二步，計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)表2查詢接頭添加比例；
      


      根據(jù)表2，查得Input DNA 100ng時(shí)接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol；
      


      第三步，計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；
      


      接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
      


      綜上，接頭可添加3.4 μL。（注：接頭最大加入體積不超過5 μL）
      


      HB220930
      


       
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883