產(chǎn)品簡介

 

重組牛腸激酶（rb-EK）是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，其氨基酸序列與牛源腸激酶輕鏈一致，有著和天然提取的腸激酶同樣特異的酶切位點，切割位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys（DDDDK），可用于去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽，保障重組融合蛋白準確的N端序列，同時重組牛腸激酶具有比天然酶更高的切割活性。

翌圣酵母表達重組牛腸激酶（His標簽）為采用畢赤酵母分泌表達的高純度、高活性、高特異的牛腸激酶，可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品帶His標簽，在切割反應完成后，可通過Ni²⁺親和柱輕松去除，極大地簡化了后續(xù)的純化流程。

 

產(chǎn)品特點

 

特異性強：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：Asp-Asp-Asp-Asp-Lys；

純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割；

無動物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料；

質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定；

產(chǎn)能充足：500L 發(fā)酵罐可獲得~50 MU腸激酶，翌圣擁有5L-1500L不同體系發(fā)酵罐，滿足不同客戶不同階段對于產(chǎn)品批量要求；

不同等級產(chǎn)品供應：R&D級別（20395ES、20401ES）、GMP級別（20396ES、20400ES），GMP級別產(chǎn)品符合ISO 13485質(zhì)量管理體系。

 

產(chǎn)品應用

 

1. 融合多肽和蛋白生產(chǎn)工藝中去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽，保障重組融合蛋白準確的N端序列。如DDDDK是八肽Flag標簽(DYKDDDDK)的一部分。rEK的使用可以輕松去除融合蛋白的Flag標簽，是研究天然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的理想工具。同時，為天然蛋白質(zhì)序列的放大生產(chǎn)，也提供了便利和保障。
2. 生物制藥領域常用于GLP-1類似物多肽類藥物的生產(chǎn)制備，如司美格魯肽、利拉魯肽等。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	20395ES60/76/90/92/94
規(guī)格	100 U/500 U/ 5000 U/100 KU/1 MU（1000 KU）

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

來源（Source）	畢赤酵母重組表達
分子量*（Molecular Weight）	理論值22.7 kDa
外觀（Appearance）	無菌液體
蛋白保存液（Storage Buffer）	50 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 50% Glycerol, pH8.0
酶濃度（Enzyme Concentration）	5 U/μL
純度（Purity）	≥95%
活性定義*（Activity Definition）	一個活性單位定義為25℃條件下，酶切12-16 h，在緩沖體系（20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 2 mM CaCl2, pH 8.0）緩沖體系下，將50 μg帶有腸激酶酶切位點的融合蛋白（翌圣腸激酶酶切陽性底物，分子量約64.6 KDa，Cat#20391ES）切開95%所需要的酶量。

分子量：^*由于畢赤酵母表達后糖基化的影響，SDS-PAGE顯示目的蛋白的分子量約40 kDa。

活性定義：^*不同底物，酶切效率可能不同；一般蛋白越小，切割效率越高，翌圣酶活定義為采用分子量約64.6 KDa的大蛋白，對于寡肽底物一般最大可達到1U切500 ug。

 

儲存條件

 

-15~-25℃保存，有效期2年。

 

使用說明（應用舉例）

 

1. 反應體系：

融合蛋白	50 μg
腸激酶	0.1-1 U (可根據(jù)蛋白大小和實際情況進行調(diào)整)
緩沖體系 （20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 2 mM CaCl2, pH 8.0）	Up to 50-500 μL（最終反應體系中蛋白濃度為0.1-1 mg/mL）

2. 反應條件：充分混勻，25℃反應16 h。

【注】重組腸激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀釋成每1 μL含0.1 U的溶液使用。

 

注意事項

 

1. 該酶效力高, 且與待切蛋白序列或結(jié)構(gòu)有關，建議測試時先做蛋白投入量梯度，以最適量投入為宜。

2. 以下條件可能對rEK的活性有一致作用：

1）高離子強度會抑制其活性。0.25 M NaCl條件下，降低rEK原活性的25%左右；2 M NaCl條件下，rEK幾乎完全被抑制其活性。

2）抑制其活性試劑可能有，>2 M Urea，>20 mM b-ME，>0.1% SDS, >50 mM imidazole等。

3）pH<6或pH>9條件也會抑制其活性。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20250108