MolPure? Mag16/48 Tissue/Cell Total RNA Kit V2（Prepackaged） 磁珠法16/48通道組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒V2（預(yù)封
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產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品適用于從動(dòng)物組織（肝臟、腎臟、脾臟、皮膚等）和細(xì)胞中提取總RNA。采用獨(dú)特的磁珠及深度優(yōu)化的緩沖體系有效捕獲釋放的核酸，提取的核酸純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，提取的核酸適用于RT-PCR、Northern Blot、體外翻譯、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品配合自動(dòng)化核酸提取儀器使用，可實(shí)現(xiàn)核酸的高通量提取。
組分信息
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類別 |
組分編號(hào) |
組分名稱 |
18607ES16 |
18607ES48 |
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Part Ⅰ |
18607-A |
96孔預(yù)裝板 |
1塊 |
1塊×3 |
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18607-B |
8聯(lián)磁棒套 |
2條/包×1 |
2條/包×3 |
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18607-C |
裂解液 |
8 mL |
22 mL |
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|
Part Ⅱ |
18607-D |
DNase I |
50μL |
150 μL |
|
18607-E |
DNase I Reaction Buffer (10×) |
160μL |
500 μL |
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18607-F |
PT液 |
80 μL |
220 μL |
儲(chǔ)存條件
Part I組分室溫保存，有效期1年。
Part II 組分-25～-15℃保存，有效期1年。
使用說(shuō)明
- PT液在-20℃中為冷凍狀態(tài)，室溫溶解后會(huì)有微量結(jié)晶，可渦旋混勻，待試劑完全溶解后使用。
- 操作前請(qǐng)?jiān)诹呀庖褐屑尤?/font>PT液至終濃度為1%，如1 mL裂解液中加入10 μL PT液，配制好的裂解液可在4℃保存一周。
搭配AP-16S 核酸提取儀自動(dòng)化提取
- DNA酶消化液配制：
1.1 常規(guī)樣本，如肝臟，腎臟，脾臟和心臟等樣本：10 μL 10 x buffer+3 μL DNaseⅠ+87μL DEPC水，輕柔吹打混勻，將配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暫存放于4℃（不超過(guò)30 min）。
1.2 微量樣本，如微量腦組織：10 μL 10 x buffer + 0.3 μL DNaseⅠ+89.7μL DEPC水，輕柔吹打混勻，將配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暫存放于4℃（不超過(guò)30 min）。
- 樣本前處理：
2.1 組織樣本：在離心管中加入450 μL裂解液，稱取10-15 mg液氮研磨后的組織樣本（肝臟及脾臟投入量小于10 mg），渦旋混勻，若有少量組織碎塊可用移液槍進(jìn)行吹打后，室溫靜置5 min得到樣本裂解液。
2.2 懸浮細(xì)胞：取不超過(guò)500萬(wàn)細(xì)胞樣本，1000rpm 4℃離心去除上清。在離心管中加入450 μL裂解液吹打混勻，室溫靜置5 min，得到樣本裂解液。
2.3 貼壁細(xì)胞：使用胰酶將貼壁細(xì)胞進(jìn)行消化并低速離心去除上清，在離心管中加入450 μL裂解液吹打混勻，室溫靜置5 min，得到樣本裂解液。若細(xì)胞量小于1×106,，可直接去除孔板內(nèi)培養(yǎng)基，向其中加入450 μL裂解液吹打混勻，室溫靜置5 min，得到樣本裂解液。
- 取出預(yù)封裝 96 深孔板，充分顛倒混勻，使用96孔板離心機(jī)短暫離心（或手甩），防止掛液。使用前小心撕去鋁箔封口膜，防止液體濺出。
- 將配制完成的DNA酶消化液加入到96深孔板中第4、10列。
- 將處理好的樣本裂解液加入樣本處理孔（第1、7列）并吹打混勻3-5次。
- 正確在提取儀中安放上述96孔預(yù)裝板，并放置8聯(lián)磁棒套。請(qǐng)按照下表進(jìn)行程序設(shè)置并啟動(dòng)運(yùn)行。程序結(jié)束后，洗脫孔（第5、11列）中的溶液即為核酸溶液。如需保存，可將其轉(zhuǎn)移至干凈的RNase-free離心管中，置于-80℃保存。
AP-16S自動(dòng)核酸提取儀提取程序
|
步驟 |
第1步 |
第2步 |
第3步 |
第4步 |
第5步 |
第6步 |
第7步 |
第8步 |
第9步 |
|
工 位 |
3 |
1 |
2 |
3 |
4 |
6 |
5 |
5 |
3 |
|
等待時(shí)間 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:05:00 |
00:00:00 |
00:03:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
|
混合模式 |
3 |
2 |
3 |
3 |
5 |
3 |
3 |
3 |
3 |
|
混合時(shí)間 |
00:00:20 |
00:05:00 |
00:02:00 |
00:02:00 |
00:15:00 |
00:02:00 |
00:05:00 |
00:00:00 |
00:00:10 |
|
是否暫停 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
|
吸磁時(shí)間 |
00:00:45 |
00:01:30 |
00:00:45 |
00:00:45 |
00:01:30 |
00:00:45 |
00:00:45 |
00:00:45 |
00:00:00 |
|
體 積 |
700 |
1000 |
700 |
700 |
100 |
700 |
100 |
100 |
700 |
|
溫 度 |
-- |
25 |
-- |
-- |
-- |
-- |
65 |
65 |
-- |
注：16通道儀器混合模式使用機(jī)器默認(rèn)即可，不可與48通道機(jī)器混用程序。
AP-48N自動(dòng)核酸提取儀提取程序
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步驟 |
第1步 |
第2步 |
第3步 |
第4步 |
第5步 |
第6步 |
第7步 |
第8步 |
第9步 |
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孔 位 |
3 |
1 |
2 |
3 |
4 |
6 |
5 |
5 |
3 |
|
等待時(shí)間 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:05:00 |
00:00:00 |
00:03:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
|
混合模式 |
2 |
1 |
2 |
2 |
3 |
2 |
2 |
2 |
2 |
|
混合時(shí)間 |
00:00:20 |
00:05:00 |
00:02:00 |
00:02:00 |
00:15:00 |
00:02:00 |
00:05:00 |
00:00:00 |
00:00:10 |
|
是否暫停 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
|
吸磁時(shí)間 |
00:00:45 |
00:01:30 |
00:00:45 |
00:00:45 |
00:01:30 |
00:00:45 |
00:00:45 |
00:00:45 |
00:00:00 |
|
體 積 |
700 |
1000 |
700 |
700 |
100 |
700 |
100 |
100 |
700 |
|
溫 度 |
-- |
25 |
-- |
-- |
-- |
-- |
65 |
65 |
-- |
混合模式1：混合速度200000，混合時(shí)間10s；混合模式2：混合速度300000，混合時(shí)間10s；混合模式3：混合速度50，混合時(shí)間10s。
注意事項(xiàng)
1. 預(yù)裝板組分如有析出或渾濁（尤其冬季等室溫為低溫環(huán)境時(shí)），可45℃加熱至溶液澄清。
2. 洗脫時(shí)可能存在磁珠殘留，吸取核酸時(shí)應(yīng)盡量避免吸入磁珠。
3. 凍存樣品避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致樣品中核酸的質(zhì)量下降。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
Ver.CN20240923
