產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品適用于從動物組織（肝臟、腎臟、脾臟、皮膚等）和細胞中提取總RNA。采用獨特的磁珠及深度優(yōu)化的緩沖體系有效捕獲釋放的核酸，提取的核酸純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，提取的核酸適用于RT-PCR、Northern Blot、體外翻譯、文庫構(gòu)建等實驗。本產(chǎn)品配合自動化核酸提取儀器使用，可實現(xiàn)核酸的高通量提取。
組分信息
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類別 |
組分編號 |
組分名稱 |
18608ES48 |
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Part Ⅰ |
18608-A |
96孔預裝板 |
1塊×3 |
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18608-B |
8聯(lián)磁棒套 |
2條/包×3 |
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18608-C |
裂解液 |
23 mL |
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18608-D |
漂洗液 |
36 mL |
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18608-E |
洗滌液 |
9 mL |
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Part Ⅱ |
18608-F |
DNase I |
150 μL |
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18608-G |
DNase I Reaction Buffer (10×) |
500 μL |
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18608-H |
PT液 |
220 μL |
儲存條件
- Part I組分室溫運輸，室溫保存，有效期1年。
- Part II 組分冰袋運輸，-20℃保存，有效期1年。
- 收到貨后，請檢查Part I、Part II共2個組分是否齊全，并立即放入對應(yīng)的保存溫度中儲存。
使用說明
- E組分洗滌液請在使用前請按照標簽說明加入對應(yīng)無水乙醇。
- 操作前請在裂解液中加入PT液至終濃度為1%，如1 mL中加入10 μL PT液，配制好的裂解液可在4℃保存一周。
- PT液在-20℃中為冷凍狀態(tài)，室溫溶解后會有微量結(jié)晶，可渦旋混勻，待試劑完全溶解后使用。
搭配AP-48 N 核酸提取儀自動化提取
- DNA酶消化液配制：
1.1 常規(guī)樣本，如肝臟，腎臟，脾臟和心臟等樣本：10 μL 10 x buffer+3 μL DNaseⅠ+87μL DEPC水，輕柔吹打混勻，將配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暫存放于4℃。
1.2 微量樣本，如微量腦組織：10 μL 10 x buffer + 0.3 μL DNaseⅠ+89.7μL DEPC水，輕柔吹打混勻，將配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暫存放于4℃。
- 樣本前處理：
2.1 組織樣本：在離心管中加入450 μL裂解液（確認已加入PT液），稱取10-15 mg液氮研磨后的組織樣本（肝臟及脾臟投入量小于10 mg），渦旋混勻后室溫靜置5 min得到樣本裂解液。若有少量組織碎塊，可用移液槍槍進行吹打。
2.2 懸浮細胞：取不超過500萬細胞樣本，1000rpm 4℃離心去除上清。在離心管中加入450 μL裂解液吹打混勻，室溫靜置5 min，得到樣本裂解液。
2.3 貼壁細胞：使用胰酶將貼壁細胞進行消化并低速離心去除上清，在離心管中加入450 μL裂解液吹打混勻，室溫靜置5 min，得到樣本裂解液。若細胞量小于1×106,，可直接去除孔板內(nèi)培養(yǎng)基，向其中加入450 μL裂解液吹打混勻，室溫靜置5 min，得到樣本裂解液。
- 取出預封裝 96 深孔板，充分顛倒混勻，使用96孔板離心機短暫離心（或手甩），防止掛液。使用前小心撕去鋁箔封口膜，防止液體濺出。
- 將配制完成的DNA酶消化液加入到96深孔板中第4、10列。
- 將處理好的樣本裂解液加入樣本處理孔（第1、7列）并吹打混勻3-5次。
- 按照提取儀的位置，正確安放上述96孔預裝板，并放置8聯(lián)磁棒套。
- 提取常規(guī)樣本請按照下表進行程序設(shè)置，啟動運行，中間機器蜂鳴后將深孔板拿出，向第4、10列中加入700 μL洗滌液并將其放回原位，啟動程序繼續(xù)運行。程序結(jié)束后，洗脫孔（第5、11列）中的溶液即為核酸溶液。如需保存，可將洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈的RNase-free離心管中，溶液可置于-80℃保存。注：若樣本為微量樣本，如提取總量小于5萬的細胞樣本，可將步驟8中溫度設(shè)置為65℃來增大核酸得率。
AP-48N自動核酸提取儀提取程序
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步驟 |
吸磁 |
結(jié)合 |
洗滌1 |
洗滌2 |
酶消化 |
洗滌3 |
洗滌4 |
洗脫 |
棄磁 |
|
工 位 |
3 |
1 |
2 |
3 |
4 |
4 |
6 |
5 |
3 |
|
等待時間 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:05:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:03:00 |
00:00:00 |
|
混合模式 |
2 |
1 |
2 |
2 |
3 |
2 |
2 |
2 |
2 |
|
混合時間 |
00:00:20 |
00:05:00 |
00:02:00 |
00:02:00 |
00:15:00 |
00:02:00 |
00:00:30 |
00:05:00 |
00:00:10 |
|
是否暫停 |
否 |
否 |
否 |
否 |
是 |
否 |
否 |
否 |
否 |
|
吸磁時間 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:00:00 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:00:00 |
|
體 積 |
700 |
850 |
700 |
700 |
100 |
800 |
700 |
100 |
800 |
|
溫 度 |
-- |
25 |
-- |
-- |
-- |
|
-- |
25 |
-- |
混合模式1：混合速度200000，混合時間10 s;
混合模式2：混合速度300000，混合時間10 s;
混合模式3：混合速度50，混合時間10 s。
- 較難提取樣本，如皮膚樣本等請按照下表進行程序設(shè)置，啟動運行，中間機器蜂鳴后將深孔板拿出，向第4、10列中加入700 μL漂洗液并將其放回原位，啟動程序繼續(xù)運行。程序結(jié)束后，洗脫孔（第5、11列）中的溶液即為核酸溶液。如需保存，可將洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈的RNase-free離心管中，溶液可置于-80℃保存。
AP-48N自動核酸提取儀提取程序
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步驟 |
吸磁 |
結(jié)合 |
洗滌1 |
洗滌2 |
酶消化 |
洗滌3 |
洗滌4 |
洗滌5 |
洗脫 |
棄磁 |
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工 位 |
3 |
1 |
2 |
3 |
4 |
4 |
3 |
6 |
5 |
3 |
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等待時間 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:05:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:03:00 |
00:00:00 |
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混合模式 |
2 |
1 |
2 |
2 |
3 |
2 |
2 |
2 |
2 |
2 |
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混合時間 |
00:00:20 |
00:05:00 |
00:02:00 |
00:02:00 |
00:15:00 |
00:02:00 |
00:02:00 |
00:02:00 |
00:05:00 |
00:00:10 |
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是否暫停 |
否 |
否 |
否 |
否 |
是 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
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吸磁時間 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:00:00 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:01:30 |
00:00:00 |
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體 積 |
700 |
850 |
700 |
700 |
100 |
800 |
700 |
700 |
100 |
800 |
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溫 度 |
-- |
25 |
-- |
-- |
-- |
|
-- |
-- |
25 |
-- |
注意事項
1. 預裝板組分如有析出或渾濁（尤其冬季等室溫為低溫環(huán)境時），可45℃加熱至溶液澄清。
2. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取洗脫液時應(yīng)盡量避免吸入磁珠。
3. 凍存樣品避免反復凍融，否則會導致樣品中核酸的質(zhì)量下降。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
Ver.CN20240722
