產品簡介

 

本產品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體 T7 RNA 聚合酶，是對野生型T7進行了改造優(yōu)化，突變得到的可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA 聚合酶。以含有 T7 啟動子序列的雙鏈 DNA 為模板，以 NTP 為底物，合成與啟動子下游的反向單鏈 DNA 互補的RNA。雙鏈線性平末端或 5’突出末端 DNA均可作為 T7 RNA 聚合酶的底物模板，因此線性質粒、PCR 產物均可用作體外合成 RNA 的模板。

 

產品性質

 

來源	重組 E. coli
最適溫度	37℃
活性	250 U/μL
宿主核酸殘留	<10 fg/U
宿主蛋白殘留	<50 ppm
RNA 酶殘留	陰性
儲存緩沖液	50mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃
活性單位定義	在 37℃、pH8.0 的條件下，1 h 內使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為一個活性單位。

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	10629ES10 (10 KU)	10629ES60 (100 KU)	10629ES86 (2500 KU)	10629ES96 (25 MU)	10629ES99 (100 MU)
10629	T7 RNA Polymerase (low dsRNA, 250 U/μL)	40 μL	400 μL	10 mL	100 mL	400 mL

關聯(lián)產品：10×Transcription Buffer GMP-grade (Cat#10670)

 

儲存條件

 

-25 ~ -15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

 

1．將所用實驗材料從 -20℃拿出，置于冰盒上解凍，充分混勻，短暫離心收集液體于管底，置于冰上備用，

2. 反應體系配制:

 

2.1 普通轉錄體系

組分	體積（μL）	終濃度
10×Transcription Buffer	2	1×
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)	2 each	10 mM each
T7 RNA Polymerase (low dsRNA, 250 U/μL)	1-1.6	-
Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	0.5	-
Pyrophosphatase,Inorganic (0.1U/μL)	0.4	-
模板 DNA	X (1μg)	-
RNase free H2O	Up to 20	-

2.2 共轉錄加帽體系

如果選擇共轉錄法加帽，則按照下表配制共轉錄加帽體系：

組分	體積（μL）	終濃度
10×Transcription Buffer	2	1×
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)	2 each	10 mM each
Cap1 帽子 (100 mM )	2	10 mM
T7 RNA Polymerase (low dsRNA, 250 U/μL)	1-1.6	-
Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	0.5	-
Pyrophosphatase,Inorganic (0.1U/μL)	0.4	-
模板 DNA	X (1μg)	-
RNase free H2O	Up to 20	-

注： 1）若轉錄長度< 100 nt，模板投入量可增加至 2 μg，轉錄時間可增至4-8 h。

2）為了提高RNA質量，建議使用質粒線性化模板進行轉錄。

3）以上反應體系為推薦反應，NTP，帽子添加量，T7 RNA 聚合酶等均可根據實際情況進行適度調整。

4）20 μL轉錄體系，參考如上體系可獲得 180-240μg 的RNA，若想獲得更多的RNA，可等比例放大反應體系，不影響反應。

5）使用試劑、容器等無 RNase 污染。

3. 在 37℃下反應 2-3 h。

4. 反應結束后，加入 1μL DNase I（Cat #10611ES），在37℃反應15 -30 min 去除 DNA 模板。

5. 合成的RNA后續(xù)需進行純化、質控，樣品合格可用于后續(xù)實驗。

 

注意事項

 

1. 本產品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20240920