產(chǎn)品簡介

 

本產(chǎn)品用于動物組織細胞裂解以獲取完整的細胞核。所獲得的細胞核可以用于后續(xù)ATAC或者CUT&Tag實驗。

 

組分信息

 

編號		組分名稱	12514ES01	12514ES56
12514-A	●	Suspension Buffer	10 mL	200 mL
12514-B	●	10% Tween-20	100 μL	2 mL
12514-C	●	10% NP40	100 μL	2 mL
12514-D	●	1% Digitonin	100 μL	2 mL

 

儲存條件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

 

1. Lysis buffer配置
2. 將Suspension Buffer、10% Tween-20、10 % NP40、1 % Digitonin從冰箱拿出，冰上完全化凍后，渦旋混勻，短暫離心后，于無菌PCR管中，依據(jù)表1所示體系配制Lysis Buffer，配制好后冰上放置。

注：Suspension Buffer可放置于4℃保存，其他組分需放置-20℃保存。

表1 Lysis Buffer體系

名稱	體積（μL）
Suspension Buffer	582 μL
10 % Tween-20	6 μL
10 % NP40	6 μL
1 % Digitonin	6 μL
Total	600 μL

 

2、樣本預處理

方案一：

將培養(yǎng)皿至于提取預冷的金屬塊上，在培養(yǎng)皿中，用刀片將組織切碎成顆粒狀（芝麻大?。?，加入600 μL預冷的Lysis Buffer，冰上靜置10 min。隨后用40 μm細胞篩過濾切碎的組織至1.5 mL EP管中，4℃，300 g離心5 min，去上清，用200 μL預冷的PBS重懸細胞核沉淀。取18 μL細胞核懸液，加入2 μL 0.4%臺盼藍溶液染色，顯微鏡下鏡檢，用血球計數(shù)板計算細胞核的濃度。(刀片切割：細胞核懸浮液體積200 μL，細胞核濃度約750個/μL；細胞篩研磨：細胞核懸浮液體積1000 μL，細胞核濃度約2000個/ μL)。根據(jù)計數(shù)結果，取50000細胞核懸液，加1000 μL預冷的PBS，4℃，300g離心3 min去除上清，收集細胞核。

收集得到的細胞核可按照ATAC試劑盒或者CUT&Tag試劑盒說明書進行后續(xù)實驗。

方案二：

取一個干凈的50mL離心管，插入冰中，去掉管蓋，將40 μm細胞篩放在管口，用鑷子將培養(yǎng)皿中清洗完成的組織放置于細胞篩中央處。取少量預冷的PBS（200 μL左右，覆蓋組織塊即可）滴加到組織處，用注射器黑色的活塞頭輕輕的研磨分散組織（研磨2圈后，觀察組織分散情況，每研磨2圈加入500 μL-1000 μL預冷的PBS沖洗組織塊，總計研磨4-6圈左右，此時，50 mL離心管中溶液呈乳白色，細胞篩表面有一層組織覆蓋）。將離心管中溶液轉至1.5 mL EP管中，4℃，300 g離心5 min，去上清，用600 μL預冷的Lysis Buffer重懸細胞核沉淀，冰上靜置5min。4℃，300 g離心5min，去上清，用1000 μL預冷的PBS重懸細胞核沉淀，隨后用40 μm細胞篩過濾重懸后的細胞核至1.5 mL EP管中。

收集得到的細胞核可按照ATAC試劑盒或者CUT&Tag試劑盒說明書進行后續(xù)實驗。

 

 

Ver.CN20240710