Hieff NGS? Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina? Multi-CUT&Tag建庫試劑盒（Nanobody-Tn5款）
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® V2
多靶標(biāo)CUT&Tag試劑盒（Nanobody-Tn5款）
一份樣本，一次實(shí)驗(yàn)，多個(gè)靶標(biāo)。節(jié)省時(shí)間和樣本。信噪比高。
產(chǎn)品應(yīng)用
蛋白質(zhì)-DNA互作研究
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
●精簡(jiǎn)操作：無需二抗，只加一抗，減少實(shí)驗(yàn)影響因子。
●一個(gè)細(xì)胞多個(gè)靶標(biāo)：一次實(shí)驗(yàn)完成兩個(gè)組蛋白修飾研究（組蛋白修飾任意組合）。
●CUT&Tag多靶標(biāo)之間互相校正、互相檢驗(yàn)，結(jié)果更真實(shí)。
●Spike in添加，進(jìn)一步增加校正能力。
產(chǎn)品描述
Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® V2是針對(duì)Illumina®高通量測(cè)序平臺(tái)研發(fā)的用于Multi-CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的文庫構(gòu)建試劑盒，適用于100-100,000個(gè)細(xì)胞起始量的樣本建庫。Multi-CUT&Tag是研究蛋白與DNA互作的技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的CUT&Tag，該技術(shù)使用nanobody-Tn5（Anti-mouse Tn5和Anti-rabbit Tn5），可實(shí)現(xiàn)一份細(xì)胞，兩種靶標(biāo)的研究，同時(shí)，該技術(shù)實(shí)驗(yàn)中無需再添加二抗。經(jīng)過細(xì)胞捕獲、一抗孵育、轉(zhuǎn)座酶孵育、轉(zhuǎn)座酶激活、摻入DNA標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞裂解、磁珠回收gDNA、文庫擴(kuò)增和磁珠分選等步驟，靶蛋白結(jié)合的DNA片段最終轉(zhuǎn)化為適用于Illumina®平臺(tái)測(cè)序的文庫。
本試劑盒包含兩個(gè)獨(dú)立模塊：BOX-I和BOX-II。BOX-I包含結(jié)合細(xì)胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文庫純化的DNA Selection Beads，BOX-II包含細(xì)胞透化劑、抗體結(jié)合buffer、轉(zhuǎn)座酶結(jié)合buffer、蛋白酶K以及后續(xù)文庫擴(kuò)增所需的所有試劑。此外，本試劑盒已在不同種類細(xì)胞（如293T、K562、CHO、ESC細(xì)胞等）中進(jìn)行了驗(yàn)證，均具有良好的建庫效率和建庫產(chǎn)量。本試劑盒提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
圖：同一細(xì)胞中不同的組蛋白修飾圖譜
同一細(xì)胞中，可實(shí)現(xiàn)不同染色質(zhì)圖譜研究，并且能很好的區(qū)分組蛋白異質(zhì)性修飾和激活修飾，同時(shí)還能清楚的顯示異質(zhì)性修飾和激活修飾的共關(guān)聯(lián)。
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
12592ES04 |
12592ES12 |
12592ES48 |
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BOX-I |
12592-A |
⇔ |
ConA Beads |
40 μL |
120 μL |
480 μL |
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12592-B |
⇔ |
DNA Extract Beads |
280 μL |
840 μL |
3.36 mL |
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12592-C |
⇔ |
DNA Selection Beads |
400 μL |
1.2 mL |
4.8 mL |
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BOX-II |
12592-D |
⇔ |
10 × Binding Buffer |
120 μL |
360 μL |
1.44 mL |
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12592-E |
⇔ |
10 × Wash Buffer |
360 μL |
1.08 mL |
4.32 mL |
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12592-F |
⇔ |
5% Digitonin |
12 μL |
36 μL |
144 μL |
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12592-G |
⇔ |
50 × PB Buffer |
6 μL |
18 μL |
72 μL |
|
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12592-H |
⇔ |
10 × Dig-300 Buffer |
400 μL |
1.2 mL |
4.8 mL |
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12592-I |
⇔ |
Anti-mouse Tn5 |
8 μL |
24 μL |
96 μL |
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12592-J |
⇔ |
Anti-rabbit Tn5 |
8 μL |
24 μL |
96 μL |
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12592-K |
⇔ |
33 × Activating Buffer |
6 μL |
18 μL |
72 μL |
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|
12592-L |
⇔ |
15 × Terminate Solution |
20 μL |
60 μL |
240 μL |
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12592-M |
⇔ |
30 × Proteinase K |
10 μL |
30 μL |
120 μL |
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12592-N |
⇔ |
DNA Spike-in Mix (5 ng/μL) |
4 μL |
12 μL |
48 μL |
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12592-O |
⇔ |
2×HiFi Amplification Mix |
100 μL |
300 μL |
1.2 mL |
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12592-P |
⇔ |
i5 Universal Primer |
8 μL |
/ |
/ |
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12592-Q |
⇔ |
i7 Index Primer (T701) |
8 μL |
/ |
/ |
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【注】：*12592ES12/48試劑盒不含Index Primer，需搭配Cat#12417進(jìn)行完整建庫；
*12592ES04中，index信息為i5 index GCCTTATG（對(duì)應(yīng)mouse來源抗體數(shù)據(jù)）、AGGATATG（對(duì)應(yīng)rabbit來源抗體數(shù)據(jù)）、i7 index TAAGGCGA（不同測(cè)序平臺(tái)，i5端對(duì)應(yīng)的序列可能需要反向，具體見參考第六部分：文庫結(jié)構(gòu)）。
***本試劑盒在實(shí)驗(yàn)前需自備蛋白酶抑制劑Cocktail（Yeasen Cat#20123ES）或其他等效產(chǎn)品
儲(chǔ)存條件
BOX-I：2~8℃保存，BOX-II：-25~-15℃保存，有效期1年。
