產(chǎn)品簡介

 

GSTSep Glutathione Agarose Resin是一種GST標(biāo)簽蛋白純化樹脂，結(jié)構(gòu)上以6%交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過12個原子的間隔臂，用化學(xué)方法共價結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成。該設(shè)計使樹脂的純化效率得到了較大提高，使其每毫升基質(zhì)可承載>20 mg GST融合蛋白（40 KDa）。此外，本品特異性好，性價比高，可以一步純化各種表達(dá)系統(tǒng)中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。

GSTSep Glutathione Agarose Resin儲存在含20%乙醇的1×PBS 中，填料和保護液的比例為1:1，我司官網(wǎng)規(guī)格為實際填料的體積。

GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒 (瓊脂糖樹脂法)由GSTSep Glutathione Agarose Resin、優(yōu)化預(yù)制的緩沖液、重力層析空柱組成，用于高效、快速純化GST標(biāo)簽蛋白，為GST標(biāo)簽蛋白的純化帶來了極大的便利。

 

產(chǎn)品信息

 

類別	編號	組分名稱	20753ES10	保存方式	翌圣貨號
Part Ⅰ	20753-A	GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(用于GST標(biāo)簽蛋白純化)	10 mL	2~8℃	20507ES
	20753-B	1x PBS Buffer，PBS 緩沖液(粉末)，PH 7.4，1L	1 L	RT	60158ES
	20753-C	1x TBS Buffer，TBS 緩沖液(粉末)，PH 7.4，1L	1 L	RT	60157ES
	20753-D	Glutathione,Reduced(GSH) 還原型谷胱甘肽(GSH)	2×1瓶 （307 mg/瓶）	2~8℃	60342ES
Part Ⅱ	20753-E	重力層析空柱，5 mL（50 μm）	10×1套	RT	20522ES

 

儲存條件

 

2~8℃保存，有效期2年。其中20753-B、20753-C、20753-D可室溫保存。

 

使用說明

 

1. 緩沖液配制

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。

平衡/洗雜緩沖液：1x PBS Buffer，PBS 緩沖液(粉末)，PH 7.4, 1L（20753-B）, 使用時用蒸餾水或超純水溶解，定容至1L即可。

10×GSH溶液：1x TBS Buffer，TBS 緩沖液(粉末)，PH 7.4, 1L（20753-C）, 使用時用蒸餾水或超純水溶解，定容至1L。還原型谷胱甘肽GSH（20753-D），使用時取1瓶（307 mg）用10 mL 1x TBS Buffe溶解并混勻，即為10XGSH溶液。配制好的10XGSH溶液-20℃保存，一年有效。

洗脫緩沖液：按照9:1的比例混合適量1x TBS Buffer和10XGSH溶液。由于GSH在溶液中容易被氧化而失效，洗脫緩沖液宜新鮮配制，配制好的洗脫緩沖液4℃保存，兩周內(nèi)有效。洗脫緩沖液含10 mM GSH。

【注】平衡/洗雜緩沖液或洗脫緩沖液中可加入1-10 mM DTT。

 

2. 樣品準(zhǔn)備

【注】樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1）細(xì)菌表達(dá)的蛋白（本說明以細(xì)菌表達(dá)蛋白為例）

a. 挑取單菌落到含有適合抗性的LB培養(yǎng)基中，根據(jù)載體說明加入相應(yīng)的誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)相應(yīng)的時間。

b. 表達(dá)結(jié)束后，將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)至離心瓶，7000 rpm，離心15 min，收集菌體，然后加入1/10體積的平衡液和PMSF（Cat#20104ES）（PMSF在破碎前加入，其終濃度為1 mM），同時也可加入其他蛋白酶抑制劑，如蛋白酶抑制劑Cocktail（用于細(xì)菌提取）（Cat#20137ES），但不能影響目的蛋白與樹脂的結(jié)合。

c. 之后加入溶菌酶，使其工作濃度為1 mg/mL。【注】如果表達(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。

d. 將菌體沉淀懸浮起來（如果菌液濃度高，可考慮加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混勻，置于冰上超聲破碎細(xì)胞，至菌液基本保持澄清。

e. 收集上述澄清蛋白液，10000 rpm，4℃離心20-30 min。取上清，0.22 µm/0.45 µm濾膜過濾后，置于冰上備用或-20℃保存。

2) 酵母、昆蟲和哺乳細(xì)胞分泌表達(dá)的可溶性蛋白

將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心瓶，5000 rpm離心10 min，收集上清。即可直接上柱純化；【注】對于大量體積的上清，需加入硫酸銨進行沉淀濃縮，之后經(jīng)平衡液透析后才能上柱。

3.  GSTSep Glutathione Agarose Resin重力柱的裝填

1）取重力層析柱，5 mL（20753-E），裝入下墊片，加入適量純水潤洗柱管和墊片，關(guān)閉下出口。

2）將GSTSep Glutathione Agarose Resin（20753-A）混合均勻，用槍頭吸取適量漿液加入重力柱中（填料實際體積占懸液的一半），打開下出口流干保護液。

3）加入適量純水沖洗填料，待柱管中液體重力流干后，關(guān)閉下出口。

4）加入潤洗后的上墊片，確保墊片與填料之間沒有空隙，且保持水平。

5）裝填好的重力柱可以直接加入平衡液進行平衡，暫不使用時則加入保護液，4℃保存。

      4.重力柱法純化

1）將裝填好GSTSep Glutathione Agarose Resin的重力柱用5倍柱體積平衡液進行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖液體系下，重復(fù)2-3次。

2）將樣品加到平衡好的重力柱中，樣品保留時間至少2 min，保證樣品和填料充分接觸，收集流出液，可以反復(fù)上樣增加結(jié)合效率。

3）用10-15倍柱體積的洗雜液進行洗雜，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）用5-10倍柱體積的洗脫液洗脫，分段收集，每一個柱體積收集一管，分別檢測，既可以保證所有結(jié)合的目的蛋白被洗脫，又可以得到高純度和高濃度的蛋白。

5）隨后依次用3倍柱體積的平衡液和5倍柱體積的去離子水清洗填料。5倍柱體積的20%乙醇平衡填料，最后將填料保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

      5.SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。

6. 填料清洗

GST標(biāo)簽蛋白純化產(chǎn)品可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會造成流速和結(jié)合載量性能下降，此時需對填料進行清洗。

1）去除一些沉淀或變形物質(zhì)

用2倍柱體積的6 M鹽酸胍溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

 

注意事項

 

1. 請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2. GSTSep Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3. 所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20250109