GSTSep Glutathione MagBeads GST標(biāo)簽蛋白純化磁珠
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產(chǎn)品描述
GST標(biāo)簽蛋白純化磁珠是一種專為高效、快速純化谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白而設(shè)計(jì)的一種新型超順磁性微球產(chǎn)品，具有快速磁響應(yīng)性、豐富羥基官能團(tuán)和粒徑相對(duì)集中等特點(diǎn)。該磁珠可通過(guò)磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標(biāo)蛋白，極大地簡(jiǎn)化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業(yè)領(lǐng)域便捷地進(jìn)行GST 融合蛋白的純化。
本品特異性好，性價(jià)比高，可以一步從細(xì)菌、酵母菌或哺乳動(dòng)物天然細(xì)胞裂解物中純化谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。GST是重組蛋白制備過(guò)程中常用的一種標(biāo)簽蛋白，以輔助目的蛋白表達(dá)、檢測(cè)、純化。
同時(shí)，在使用磁性分離法的Pull-down實(shí)驗(yàn)中，充當(dāng)“誘餌蛋白”的重組GST融合蛋白通過(guò)親和作用與磁珠結(jié)合，當(dāng)目標(biāo)蛋白與固相載體混合時(shí)，就可被誘餌蛋白吸附，在磁力下，目標(biāo)蛋白就從表達(dá)體系中分離出來(lái)，使用該磁珠進(jìn)行GST Pull-down實(shí)驗(yàn)，由于磁性分離不需要多次離心和較長(zhǎng)的孵育時(shí)間，與傳統(tǒng)的層析法相比，操作更簡(jiǎn)單、快速和自動(dòng)化。
翌圣為您提供蛋白純化實(shí)驗(yàn)整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購(gòu)請(qǐng)參考：蛋白純化系列產(chǎn)品-選購(gòu)指南
產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì) |
磁性瓊脂糖微球 |
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配體 |
Glutathione (谷胱甘肽) |
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載量 |
5-10 mg GST標(biāo)簽融合蛋白/ mL磁珠 |
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粒徑 |
30-100 μm |
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磁珠濃度 |
磁珠懸浮于保護(hù)液中，含量為20% |
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儲(chǔ)存緩沖液 |
含20%乙醇的1×PBS |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1.磁珠保存過(guò)程中避免冷凍、干燥和高速離心等操作。
2.磁珠使用前，請(qǐng)充分震蕩，使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。
3.使用過(guò)的磁珠重復(fù)使用時(shí)，建議純化同一種蛋白，純化不同種蛋白時(shí)，建議使用新磁珠，以避免交叉污染。
4.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5.本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
- 緩沖液配制
1.平衡液/洗雜液：PBS, pH 7.4 (140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7.4）
2.洗脫液：50 mM Tris-HCl, 10 mM-20 mM還原型谷胱甘肽，pH 8.0
二、樣本制備
【注】樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)。
2.1細(xì)菌或酵母表達(dá)的蛋白
1）將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中，7,000 rpm (7,500 xg)，離心15 min收集菌體，然后按照菌體：平衡液=1: 10 （W/V）加入平衡液，加入終濃度為1 mM的PMSF。加入溶菌酶，使其工作濃度為0.2-0.4 mg/mL。如果表達(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶。
2）同時(shí)也可加入其他蛋白酶抑制劑，但不能影響目的蛋白與磁珠的結(jié)合。
3）將菌體沉淀懸浮起來(lái)，（如果菌液濃度高，也可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I）,混勻，冰上超聲破碎細(xì)胞，至菌液基本保持澄清。
4）將澄清的破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中，10,000 rpm (15,000 xg)，4℃離心20-30 min。 取上清，置于冰上備用或-20℃保存。
2.2酵母、昆蟲(chóng)和哺乳細(xì)胞分泌表達(dá)可溶性蛋白
1）將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯中，5,000 rpm (3,800 xg)，離心10 min，收集菌體得上清，即可直接使用。
2）對(duì)于大量體積的上清，需加入硫酸銨沉淀濃縮后，然后用Lysis Buffer透析后才能上樣。
三、磁珠準(zhǔn)備
1.可根據(jù)目標(biāo)蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息來(lái)準(zhǔn)備適量的磁珠（磁珠體積為總體積的20%）,將磁珠反復(fù)顛倒，充分混勻，使用移液器取適量的磁珠懸浮液，置于離心管中，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄清液。
2.將離心管從磁分離器上取下來(lái)，加入與懸浮液等體積的平衡液，使用槍頭反復(fù)吹打5次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄清液，重復(fù)洗滌2次。
四、GST標(biāo)簽蛋白純化
1. 結(jié)合 將備好的樣本加入到處理好的磁珠中，反復(fù)顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫孵育30 min以上（也可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整，延長(zhǎng)孵育時(shí)間）。
2. 洗雜 將離心管置于磁分離器，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留，以備取樣檢測(cè)。向離心管中加入5倍懸浮液體積的洗雜液，使用槍頭反復(fù)吹打5次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清液。至少重復(fù)上述步驟2次。
3. 洗脫 在上述離心管中加入3-5倍磁珠體積的洗脫液，用移液器吹打5次，然后在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管，5-10 min后，置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，吸取上清液，收集洗脫組分，即為目標(biāo)蛋白。重復(fù)操作兩次，分別收集洗脫組分，留待檢測(cè)。
4.磁珠保存 使用后的磁珠用1 mL洗脫液重懸磁珠，然后置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。該操作重復(fù)兩次。 再加入1 mL平衡液，懸浮磁珠，然后置于磁分離器上，大約1 min,待溶液變澄清后，吸棄上清液。再加入4倍磁珠體積的20%乙醇，置于4℃保存。
五、Pull-Down 實(shí)驗(yàn)
1.磁珠結(jié)合誘餌蛋白 將含有GST標(biāo)簽誘餌蛋白的樣品加入到備好的磁珠中，顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫孵育30 min以上（時(shí)間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整）。
2.洗雜 將離心管置于磁分離器，大約1min，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留，以備取樣檢測(cè)。向離心管中加入5倍懸浮液體積的洗雜液，使用槍頭反復(fù)吹打5-10次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清液。重復(fù)上述步驟2次。 即得到GST誘餌蛋白-磁珠復(fù)合物。
3.目標(biāo)蛋白與誘餌蛋白-磁珠復(fù)合物結(jié)合 將含有目標(biāo)蛋白的樣品加入到處理好的誘餌蛋白-磁珠復(fù)合物中，顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫孵育30 min以上（時(shí)間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整）。
4.洗雜 將離心管置于磁分離器，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留，以備取樣檢測(cè)。向離心管中加入5倍懸浮液體積的洗雜液，使用槍頭反復(fù)吹打5-10次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min,待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清液。重復(fù)上述步驟2次。 目標(biāo)蛋白通過(guò)與誘餌蛋白的結(jié)合，從混合體系中被捕獲。
5.目的蛋白的洗脫 在上述離心管中加入3-5倍磁珠體積的洗脫液，用移液器吹打5次，然后在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管，5-10 min后， 置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，吸取上清液，收集洗脫組分，即得到靶蛋白和目標(biāo)蛋白復(fù)合物。再重復(fù)操作兩次，分別收集洗脫組分，留待檢測(cè)。
HB220315
