Cebrary? Colorectal Growth Medium（Human） 結(jié)直腸類器官生長(zhǎng)培養(yǎng)基
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Cebrary® Colorectal Growth Medium（Human）結(jié)直腸類器官生長(zhǎng)培養(yǎng)基是一種無(wú)血清可應(yīng)用于細(xì)胞或組織來(lái)源的結(jié)直腸類器官的建立和長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程，在細(xì)胞外基質(zhì)存在的條件下，培養(yǎng)基所含特有組分及豐富的細(xì)胞因子能促使結(jié)直腸細(xì)胞迅速生長(zhǎng)成并形成結(jié)直腸類器官，類器官形成過(guò)程平穩(wěn)且迅速，同時(shí)保持較高的結(jié)直腸細(xì)胞特性和活力，為后續(xù)基于結(jié)直腸類器官的生理功能、疾病研究和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)提供支持。
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
41443ES60 |
41443ES76 |
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41443 - A |
Cebrary® Colorectal Growth Medium（Human） 結(jié)直腸類器官生長(zhǎng)培養(yǎng)基 |
95 mL |
475 mL |
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41443 - B |
Nutritional components 1營(yíng)養(yǎng)組分1 |
4 mL |
20 mL |
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41443 - C |
Nutritional components 2營(yíng)養(yǎng)組分2 |
1 mL |
5 mL |
儲(chǔ)存條件
41443 - A：2 ~ 8℃儲(chǔ)存，有效期12月；
41443 - B：-80℃儲(chǔ)存，有效期12月；
41443 - C：-80℃儲(chǔ)存，有效期12月。
使用說(shuō)明
使用前將41443 - B和41443 - C置于2℃ - 8℃冰箱2 - 3小時(shí)，待完全融化后，將41443 - B和41443 - C加入到組分A中，充分混勻，配制成完全培養(yǎng)基。建議完全培養(yǎng)基在1 - 3個(gè)月內(nèi)使用完，41443 - B和41443 -C請(qǐng)勿反復(fù)凍融。
人源結(jié)直腸原代培養(yǎng)
- 標(biāo)本離體后，盡快取材。采用無(wú)菌器械，保證無(wú)菌環(huán)境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的15 mL離心管中，4℃轉(zhuǎn)運(yùn)。
- 在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入20 mL DPBS，搖晃清洗。更換DPBS，重復(fù)清洗至液體澄清。
- 去除DPBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代組織保存液的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用無(wú)菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約0.5 mm - 1 mm）。
- 將組織轉(zhuǎn)移至50 mL離心管內(nèi)，加入20 mL DPBS，重復(fù)清洗至液體澄清。
- 收集組織碎片，加入組織消化液消化20 - 30 min，加入3倍體積的DPBS終止消化，并使用移液器或者無(wú)菌一次性吸管吹打懸液至無(wú)明顯組織塊。
- 反復(fù)吹打后過(guò)70 μm篩網(wǎng)，收集結(jié)直腸細(xì)胞。
- 向組織消化的離心管內(nèi)再次加入20 mL DPBS，吹打后將細(xì)胞懸液再次經(jīng)100 μm細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾至離心管內(nèi)。
- 4℃，300 g，離心5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。
- 向沉淀中加入1 mL DPBS混勻，取合適體積混合液至細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)計(jì)算總細(xì)胞數(shù)量及活率。
- DPBS定容至5 mL。4℃，300 g，離心5 min，離心后棄上清。
- 使用預(yù)冷的完全培養(yǎng)基將基質(zhì)膠稀釋到70%。
- 沉淀中加入稀釋的基質(zhì)膠，并調(diào)節(jié)至每微升基質(zhì)膠含100 - 1000細(xì)胞/細(xì)胞團(tuán)。
- 吹打使類器官與基質(zhì)膠混合，類器官基質(zhì)膠混合液以50 μL/孔滴加至24孔培養(yǎng)板孔中心。
- 37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育10 - 15 min。
- 孵育結(jié)束每孔加入500 μL結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基。
- 37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，每2 - 3天更換一次新鮮培養(yǎng)基。
- 類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數(shù)量、增殖速度、形態(tài)、微生物污染情況等。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3. 產(chǎn)品的分裝、使用等操作需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。
Ver.CN20250415
