產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA為模板進(jìn)行多重定量PCR反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
本試劑盒利用耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的MP Buffer，Enzymes Mix等，緩沖液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多達(dá)四重的反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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13110ES60 (100 T) |
13110ES80 (1000 T) |
13110ES92 (10000 T) |
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13110-A |
2×Hifair® V MP Buffera,b |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
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13110-B |
Hifair® V Enzyme Mixc |
100 μL |
1 mL |
5 mL×2 |
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13110-C |
RNase Free H2O |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
【注】a) 2×Hifair® V MP Buffer為Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的簡(jiǎn)寫。
b) 不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號(hào)10200ES產(chǎn)品。
c) Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
適用機(jī)型
ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;
Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.
運(yùn)輸與保存方式
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
反應(yīng)體系
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組分 |
體積（μL） |
體積（μL） |
終濃度 |
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2×Hifair® V MP Buffer |
12 |
15 |
1× |
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Hifair® V Enzyme Mix |
1 |
1.5 |
- |
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Primer/Probe Mix (10 μM) |
1-4 |
1-4 |
0.4 μM |
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模板 RNA |
1-5 |
1-10 |
- |
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RNase Free H2O |
To 25 |
To 30 |
- |
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【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a) 引物濃度：Primer Mix中包含多對(duì)引物，通常每條引物終濃度為0.4 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM間進(jìn)行調(diào)整。
b) 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號(hào)的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。
c) 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序
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反應(yīng)階段 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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1 |
逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃a |
10 min |
1 |
|
2 |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
3 |
擴(kuò)增反應(yīng) |
95℃ |
15 sec |
45 |
|
60℃b |
30 secc |
【注】
a) 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者50℃均可，時(shí)間10-15 min。
b) 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。CDC官方推薦的ORF1ab和N引物，退火溫度建議≥60℃。
c) 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測(cè)儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
相關(guān)產(chǎn)品
新冠狀病毒檢測(cè)相關(guān)的試劑盒和組分，批間差小，無污染；
每一個(gè)酶都經(jīng)過工藝放大到百升，在十萬級(jí)凈化車間生產(chǎn)和包裝，過30家客戶在使用我們的產(chǎn)品。
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原料應(yīng)用類型 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
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假病毒 |
11900ES |
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一步法RT-PCR |
13110ES |
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Hifair® V nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG防污染) |
13111ES |
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逆轉(zhuǎn)錄用酶 |
11300ES |
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10603ES |
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Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)（無甘油版） |
10703ES |
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定量檢測(cè)用酶 |
13086ES |
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|
防污染系統(tǒng) |
10303ES |
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10128ES |
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dNTP |
10125ES |
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等溫?cái)U(kuò)增用酶 |
12908ES |
HB200219
