產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
FuniCut® 系列內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA 等。FuniCut® 系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
15039ES70 |
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規(guī)格 |
200 T |
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識別位置 |
5'-G↓TGCAC-3' 3'-CACGT↑G-5' |
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推薦反應(yīng)條件 |
1×FuniCut® 緩沖液；最適37℃孵育 |
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酶活 |
10 U/μL |
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失活條件 |
80°C孵育20 min |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
15039ES70 |
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15039-A |
FuniCut® ApaLI |
200 μL |
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15039-B |
10×FuniCut® Buffer |
2×1 mL |
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15039-C |
10×FuniCut® Color Buffer* |
2×1 mL |
*10×FuniCut® Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。FuniCut® Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
注意事項
- 3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
- 受CpG甲基化影響，序列完全重疊，剪切阻斷。
- 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
- 本產(chǎn)品僅作科研用途。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）
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組分 |
質(zhì)粒DNA |
PCR產(chǎn)物 |
基因組DNA |
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ddH2O |
15 μL |
16 μL |
30 μL |
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10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer |
2 μL |
3 μL* |
5 μL |
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底物DNA |
2 μL (~1 μg) |
10 μL (~0.2 μg) |
10 μL (5 μg) |
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FuniCut® ApaLI |
1 μL |
1 μL |
5 μL |
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Total |
20 μL |
30 μL |
50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強度，10×FuniCut® Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗，酶切前需純化PCR產(chǎn)物。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴。
3) 37℃孵育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR產(chǎn)物），或30~60 min（基因組DNA）。
4) 80°C溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。
5) 如果使用FuniCut® Color Buffer進行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可直接上樣電泳。
2. 雙酶切或多酶切
1) 每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴大反應(yīng)體系。
2) 所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10。
3) 如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進行孵育。
3. 質(zhì)粒的擴大反應(yīng)體系
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組分 |
體積（20 μL） |
體積（20 μL） |
體積（50 μL）* |
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DNA |
1 μg |
2 μg |
5 μg |
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FuniCut® ApaLI |
1 μL |
2 μL |
5 μL |
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10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer |
2 μL |
2 μL |
5 μL |
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Total |
20 μL |
20 μL |
50 μL |
*如果總反應(yīng)體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時間。
4. 不同DNA中的識別位點數(shù)
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λDNA |
ΦX174 |
pBR322 |
pUC57 |
pUC18/19 |
SV40 |
M13mp18/19 |
Adeno2 |
|
4 |
1 |
3 |
3 |
3 |
0 |
1 |
7 |
5. 甲基化修飾影響
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Dam |
Dcm |
CpG |
EcoKI |
EcoBI |
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無影響 |
無影響 |
序列可能重疊，剪切阻斷 |
無影響 |
無影響 |
6. 不同反應(yīng)緩沖液中的活性*
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反應(yīng)緩沖液 |
FuniCut® Buffer |
Thermo Scientific FastDigest Buffer |
NEB CutSmart® Buffer |
Takara QuickCut™ Buffer |
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活性 |
100% |
75% |
100% |
100% |
*活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。
Ver.CN20231228
