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COA
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產品描述
Hieff® Gold T4 DNA Ligase在ATP做輔酶的情況下可催化dsDNA 平末端或粘性末端相鄰核酸的5’磷酸末端和3’羥基末端形成磷酸二酯鍵，還可催化RNA和雙鏈中的ssDNA 或RNA 鏈連接，但不能催化全單鏈核苷酸間的連接。
本品主要適用于標記RNA 3’-末端，環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
產品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產品貨號（規(guī)格） |
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10300ES80（1000 U） |
10300ES97（50000 U） |
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10300-A |
Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) |
200 µL |
10 mL |
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10300-B |
10 × Ligase Buffer |
400 µL |
20 mL |
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
單位定義
在20 μL的連接反應體系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ 分解物在16℃下反應30 min時，催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg IL23R質粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
注意事項
1）Buffer在融解時，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正常現(xiàn)象，請顛倒混勻后使用。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3）本產品僅作科研用途！
使用方法
1. 在無菌微量離心管中配制以下反應體系：
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組分 |
使用量 |
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載體DNA |
50-100 ng |
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插入片段 |
片段與載體的分子摩爾比應在3:1-5:1 |
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10 × Ligase Buffer |
2 µL |
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Hieff® Gold T4 DNA Ligase (5 U/µL) |
1 µL |
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ddH2O |
To 20 µL |
【注】：平末端載體與DNA片段進行連接時，應先將載體進行去磷酸化處理，以防發(fā)生自連接現(xiàn)象。為提高連接效率，每20 µL反應體系中可以加2 µL 50% PEG 4000。
2. 16℃反應過夜。
3. 轉化實驗
1）將連接產物加入到100 µL 感受態(tài)細胞中（連接產物不應超過感受態(tài)細胞的1/10），輕彈混勻，冰上孵育30 min。
2）將離心管于42℃，熱激90 sec（不要晃動），之后立刻置于冰水浴靜置2-3 min。
3）向離心管中加入900 µL LB或SOC培養(yǎng)基，37℃，150 rpm，振蕩培養(yǎng)45 min，該過程使菌體復蘇，抗性基因表達。
4）2500 g 離心5 min，吸去900 µL上清，用剩余培養(yǎng)基重懸菌體，用無菌涂布棒將剩余菌體在正確抗性的平板上涂布均勻，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培養(yǎng)過夜。
【注】：如果使用超級感受態(tài)細胞（轉化效率＞108 cfu/µg），可直接吸取100-200 µL 37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周內均可重新涂板。
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產品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶HOT |
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100/500/1000 U |
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20 T |
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HB210924
