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      T7 RNA Polymerase(250 U/μL)
       
      更多活動(dòng)更多優(yōu)惠，盡在翌圣商城》
       
       
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
      本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達(dá)來源的噬菌體T7 RNA聚合酶，以含有T7啟動(dòng)子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與啟動(dòng)子下游的反向單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板，因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。
      


      注：G*為RNA轉(zhuǎn)錄的第一個(gè)堿基。
      


       
      


      產(chǎn)品性質(zhì)
      


      
	
		
      
			
			
      來源（Source）
      
			      		
			
			
      重組E. coli
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      最適溫度（Optimum Temperature）
      
			      		
			
			
      37℃
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      宿主核酸殘留（Host Nucleic acid Residue）
      
			      		
			
			
      <10 fg/U
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      宿主蛋白殘留（Host Protein Residue）
      
			      		
			
			
      <50 ppm
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNA酶殘留（RNase Residue）
      
			      		
			
			
      陰性
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer）
      
			      		
			
			
      50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      活性單位定義（Unit Definition）
      
			      		
			
			
      在 37℃、pH8.0 的條件下，1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位。
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】：具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標(biāo)請查看批次質(zhì)檢報(bào)告。
      


       
      


      產(chǎn)品組分
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號(hào)
      
			      		
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10626ES10 (10 KU)
      
			      		
			
			
      10626ES60 (100 KU)
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10626-A
      
			      		
			
			
      T7 RNA polymerase (250 U/μL) 
      
			      		
			
			
      40 μL
      
			      		
			
			
      400 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10626-B
      
			      		
			
			
      10×Transcription Buffer
      
			      		
			
			
      500 μL
      
			      		
			
			
      1 mL×5
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】：10×Transcription Buffer中含460 mM MgCl2和100 mM DTT，但不含有NTP，如需請購買本翌圣產(chǎn)品Cat#10133。
      


       
      


      產(chǎn)品應(yīng)用
      


      1. 單鏈 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA前體，以及同位素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記的RNA探針）。
      


      2. 以（Cap analog）為引物合成Capped mRNA。
      


       
      


      運(yùn)輸和保存方法
      


      干冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期一年。
      


       
      


      注意事項(xiàng)
      


      1. DNA模板的種類：推薦使用含T7啟動(dòng)子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。
      


      2. 轉(zhuǎn)錄模板的純度會(huì)顯著影響體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。在質(zhì)粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)錄RNA的質(zhì)量。通過酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板；PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。
      


      3. 在20 μL反應(yīng)體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶可顯著提高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量。
      


      4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
      


       
      


      應(yīng)用實(shí)例
      


      按下列體系配制反應(yīng)體系
      


      
	
		
      
			
			
      組分
      
			      		
			
			
      體積（μL）
      
			      		
			
			
      終濃度
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)
      
			      		
			
			
      2
      
			      		
			
			
      1×
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)
      
			      		
			
			
      0.4 each
      
			      		
			
			
      2 mM each
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      T7 RNA Polymerase (250 U/μL)
      
			      		
			
			
      0.8
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNase inhibitor (40 U/μL)
      
			      		
			
			
      1 
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNase free H2O
      
			      		
			
			
      Up to 18
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      模板DNA
      
			      		
			
			
      2 (100 ng-1μg) 
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
	      

      


      注： 1) DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺，亞精胺濃度過高會(huì)引起DNA模板沉淀。
      
2) Buffer和水建議放置到室溫，然后開始使用，反應(yīng)于室溫下配制，防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
      
3) 若轉(zhuǎn)錄長度< 100 nt，模板投入量可增加至2 μg。
      
4) RNase inhibitor (40 U/μL)請購買翌圣產(chǎn)品Cat#10603。
      
5) 為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄，建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5′突出末端。
      


      2. 在37℃下反應(yīng)1-2 h（若轉(zhuǎn)錄長度≤ 100 nt，增加時(shí)間至4-8 h）。
      


      3. 反應(yīng)結(jié)束后，使用2 U DNaseⅠ（無RNase）37℃、15 min去除DNA模板。
      


      4. 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物純化：體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可選用RNA Cleaner磁珠進(jìn)行純化（翌圣產(chǎn)品Cat#12602），以去除蛋白、鹽離子和其他雜質(zhì)。也可以采用酚/氯仿純化法（具體操作步驟可聯(lián)系翌圣索?。?。
      


       
      


      HB220325
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883