Heparin Agarose 6FF是一種新型親和層析介質(zhì)，是將肝素偶聯(lián)到交聯(lián)瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上。肝素是一種含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結(jié)合蛋白、限制內(nèi)切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子結(jié)合，因此本產(chǎn)品可應(yīng)用于上述產(chǎn)品的分離純化，同時產(chǎn)品基團(tuán)脫落少，使用壽命長，操作方便。

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產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠
配基	肝素
配基密度	>5 mg/mL
粒徑	45-165 µm
載量	>3 mg抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）/mL基質(zhì)
耐壓流速	250-400 cm/h（在0.1 MPa）
耐熱性	121℃，0.02 M NaH2PO4 pH7.5，30 min，5次
PH穩(wěn)定性	4~10（長期）；3~13（短期，CIP）
化學(xué)穩(wěn)定性	在常用水相溶液中穩(wěn)定：0.1M氫氧化鈉；0.05M乙酸鈉；8M尿素；6M鹽酸胍；非離子去污劑；10%丙三醇
儲存緩沖液	20%乙醇+0.05 mol/L乙酸鈉緩沖液，4~8℃

 

運(yùn)輸和保存方法

1.常溫運(yùn)輸，避免日曬、雨淋、重壓。

2.密封保存在4~8℃（保存溶液為20%乙醇+0.05mol/L乙酸鈉緩沖液）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍。

3.有效期5年。

 

注意事項

1.該介質(zhì)從冷室或冰箱中取出后最好在室溫下恢復(fù)到室溫，然后緩慢搖勻后裝柱，以免產(chǎn)生氣泡影響柱效。

2.吸附：20 mmol/L~50 mmol/L，pH7.4~8.0的緩沖液，為避免離子交換的干擾，緩沖液可適當(dāng)加50 mmol/L~100 mmol/L NaCl，最常用的為Tris-HCl緩沖溶液。

3.上樣樣品必須與平衡柱子緩沖液的 pH、電導(dǎo)相同。

4.洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快。

5.加樣及整個洗脫過程中，嚴(yán)防柱面變干。

6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

7.本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1 裝柱 

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

2 平衡

用2～5個柱床體積的初始緩沖溶液進(jìn)行平衡，直至pH和電導(dǎo)率保持不變。常用的緩沖液為pH 7.4～8.0的0.02 mol/L～0.05 mol/L的Tris-HCl或PBS緩沖液。

3 上樣

樣品的預(yù)處理：樣品需先用0.45 μm濾膜過濾，然后上樣，以免堵塞層析柱。上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可通過線性實驗找到最佳上樣量。

4 洗脫

可通過改變離子強(qiáng)度來達(dá)到洗脫效果，一般可在pH7.4～8.0的緩沖液中加0.2～2 mol/L NaCl 進(jìn)行，也可改變 pH 值來進(jìn)行洗脫。一般洗脫方式有恒定洗脫、梯度洗脫、階躍洗脫，推薦使用梯度洗脫。

5 在位清洗

1）去除因離子交換作用吸附的蛋白：用2 mol/L NaCl溶液反向清洗2～3個柱床體積。

2）去除強(qiáng)疏水性蛋白和脂質(zhì)等：用70%乙醇或者30%異丙醇反向清洗4個柱床體積。

6 再生

先用0.1 mol/L Tris-HCl pH7.0緩沖液洗3個柱床體積，然后用0.1 mol/L NaOH（含2 mol/L NaCl）洗3個柱床體積，最后用20%乙醇溶液洗3個柱床體積。經(jīng)常用酸堿洗填料會使填料的吸附能力下降，所以清洗要盡量縮短時間。  

                                          HB220606