Anti-Flag親和純化凝膠
1. 產(chǎn)品概述
Anti-Flag親和純化凝膠（Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel），主要用于帶有Flag標(biāo)簽的融合蛋白免疫沉淀（IP）和純化，其核心組分是抗體與凝膠組成的吸附劑。本產(chǎn)品選用高質(zhì)量的鼠源IgG2b單克隆抗體，通過(guò)供價(jià)偶聯(lián)的方式與Sepharose 4B gel形成緊密聯(lián)系的吸附劑，能夠特異性吸附Flag蛋白序列，得到高純度的Flag標(biāo)簽蛋白。
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« 目的蛋白載量高：載量≥1.1mg蛋白/mL凝膠 « 結(jié)合蛋白類型多：Met-FLAG–Protein，N端FLAG–Protein，C端FLAG-Protein « 填料質(zhì)量硬：包被高質(zhì)量的鼠源IgG2b單克隆抗體，濃度>7.5g抗體/L凝膠 « 性價(jià)比更高：進(jìn)口一半的價(jià)格，一年節(jié)省50%科研經(jīng)費(fèi) |
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2. 產(chǎn)品原理
Anti-Flag親和純化凝膠的核心原理為親和純化技術(shù)：利用生物分子之間的特異性結(jié)合的作用進(jìn)行生物物質(zhì)的分離純化，將鼠源IgG2b單克隆抗體與Sepharose 4B gel通過(guò)供價(jià)偶聯(lián)制備形成特異性吸附Flag蛋白序列的親和吸附劑，將帶有Flag標(biāo)簽的目的蛋白吸附到吸附劑上，然后選擇合適的洗脫液將目的蛋白從吸附劑上解吸。具體流程圖如下：
圖1 Anti-Flag親和純化凝膠實(shí)驗(yàn)流程圖
3. 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1）超高純化效率
本產(chǎn)品具有超高的純化效率，≥1.1mg蛋白/mL凝膠的載量，可滿足所有實(shí)驗(yàn)要求。
圖2 Yeasen Anti-Flag親和純化凝膠質(zhì)檢數(shù)據(jù)
Line 1：翌圣Flag-gel與E. coli裂解液混合純化后電泳；Line 2：陰性對(duì)照
2）PK進(jìn)口品牌S*M2 Flag-gel
高品質(zhì)，高質(zhì)量，與進(jìn)口產(chǎn)品相比，同樣不懼
圖3 PK進(jìn)口品牌S*M2 Flag-gel
Line 1,2: 翌圣Flag-gel, 3×Flag peptide洗脫; Line 3,4: 翌圣Flag-gel, Gly-HCl洗脫; Line 5,6: S*M2 Flag-gel, 3×Flag peptide洗脫; Line 7,8: S*M2 Flag-gel, Gly-HCl洗脫
3）更高性價(jià)比
Yeasen致力于為您提供性價(jià)比高的產(chǎn)品，Anti-flag親和純化凝膠可為您節(jié)約50%科研經(jīng)費(fèi)。
圖4 Yeasen Anti-Flag親和純化凝膠產(chǎn)品與S品牌同級(jí)別產(chǎn)品價(jià)格比較
4. 常見(jiàn)問(wèn)題
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問(wèn)題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過(guò)高 |
填料被堵塞 |
清洗樹(shù)脂。 |
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裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22µm或0.45µm濾膜過(guò)濾，或離心去除。 |
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樣品太黏稠 |
樣品中含高濃度的核酸，延長(zhǎng)破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5µg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min |
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緩沖液太黏稠 |
有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速。 |
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洗脫組分中無(wú)目的蛋白 |
Flag標(biāo)簽蛋白變性了 |
使用溫和的裂解條件，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。 |
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過(guò)度的裂解使目的蛋白變性 |
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Flag多肽失效 |
更換Flag多肽 |
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目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 |
在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10mM |
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融合蛋白改變了Flag的構(gòu)象，影響了目的蛋白的結(jié)合力 |
測(cè)定pGEX中Flag的結(jié)合力，對(duì)載體進(jìn)行超聲處理，檢測(cè)其結(jié)合力。如果載體中Flag有很高的親和力，有可能是改變?nèi)诤系鞍椎臉?gòu)象從而降低了Flag標(biāo)簽蛋白的親和力。 |
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降低結(jié)合溫度至4℃，充分清洗。 |
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目的蛋白沒(méi)有完全洗脫下來(lái) |
洗脫體積太少 |
增加洗脫液體積，減小洗脫流速。 |
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洗脫液中Gly-HCl的pH 發(fā)生改變 |
使用新鮮配制的洗脫液 |
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洗脫液孵育時(shí)間不夠 |
增加洗脫液與凝膠的孵育時(shí)間 |
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電泳或western blot檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)多條帶 |
Flag融合蛋白已經(jīng)發(fā)生降解 |
在裂解液中加入蛋白酶抑制劑，如加入1 mM PMSF |
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可能是蛋白酶對(duì)目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT） |
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細(xì)胞破碎過(guò)度 |
減少細(xì)胞破碎時(shí)間，超聲前加入溶菌酶（菌液體積的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免發(fā)泡導(dǎo)致蛋白酶變性，過(guò)度超聲破碎增加宿主內(nèi)源蛋白與Flag融合目的蛋白的共純化。 |
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抗體與E. coli的各種蛋白反應(yīng) |
抗體吸附E. coli蛋白：Flag-抗體；超聲處理去除Flag抗體，可以用Western Blot檢測(cè) |
5. 訂購(gòu)信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
價(jià)格（元） |
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20585ES01 |
100 μL |
856.00 |
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20585ES03 |
1 mL |
1936.00 |
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20585ES08 |
5 mL |
6236.00 |
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20585ES25 |
25 mL |
27286.00 |
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20585ES60 |
100 mL |
96756.00 |
6. 相關(guān)產(chǎn)品推薦
His標(biāo)簽蛋白純化
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產(chǎn)品名稱 |
載量（/mL填料） |
最大壓力 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格（mL） |
價(jià)格（元） |
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＞40mg 6×His-tagged protein |
0.1MPa, 1bar |
20502ES10/50/60 |
10/50/ 100/1000 |
678/2848/ 5328/42686 |
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＞40mg 6×His-tagged protein |
0.3MPa, 3bar |
20503ES10/50/60/80 |
10/50/ 100/1000 |
798/3358/ 5838/44686 |
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＞40mg 6×His-tagged protein |
0.3MPa, 3bar |
20504ES08/25 |
5/5×5 |
728/2938 |
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HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1mL（His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，1 mL） |
＞40mg 6×His-tagged protein |
0.3MPa, 3bar |
20505ES03/08 |
1/5×1 |
298/1048 |
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≥0.6mg蛋白 |
—— |
20589ES03/08/25/60 |
1/5/25/100 |
4356/13756/ 62786/189756 |
GST標(biāo)簽蛋白純化
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產(chǎn)品名稱 |
載量（/mL填料） |
最大壓力 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格（mL） |
價(jià)格（元） |
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＞20mg GST protein（40kDa） |
0.1 MPa,1bar |
20507ES10/50/60/80 |
10/50/ 100/1000 |
928/3848/ 6898/48686 |
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＞10mg GST protein（40kDa） |
0.3 MPa,3bar |
20508ES10/50/60/80 |
10/50/ 100/1000 |
1238/4568/ 7928/54686 |
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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column,1mL（GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，1mL） |
＞10mg GST protein（40kDa） |
0.3 MPa,3bar |
20509ES03/08 |
1/5×1 |
328/1348 |
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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column,5mL（GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，5mL） |
＞10mg GST protein（40kDa） |
0.3 MPa,3bar |
20510ES08/25 |
1/5×1 |
938/3928 |
MBP標(biāo)簽蛋白純化
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產(chǎn)品名稱 |
載量（/mL填料） |
最大壓力 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格（mL） |
價(jià)格（元） |
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＞10mg MBP蛋白（80kDa） |
0.3 MPa,3bar |
20515ES08/25 |
5/25 |
858/2958 |
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＞10mg MBP蛋白（80kDa） |
0.3 MPa,3bar |
20516ES03/08 |
1/5×1 |
358/1258 |
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＞10mg MBP蛋白（80kDa） |
0.3 MPa,3bar |
20517ES03/25 |
5/5×5 |
1238/3958 |
HA/Myc/V5標(biāo)簽蛋白純化
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產(chǎn)品名稱 |
蛋白結(jié)合量（/mL填料） |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
價(jià)格（元） |
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≥0.6mg蛋白 |
20586ES03/08/25/60 |
1/5/25/100mL |
4356/13756/ 62786/189756 |
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≥0.6mg蛋白 |
20587ES03/08/25/60 |
1/5/25/100mL |
4356/13756/ 62786/189756 |
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≥1.1mg蛋白 |
20588 ES03/08/25/60 |
1/5/25/100mL |
4356/13756/ 62786/189756 |
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