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      Hieff? Novel T4 DNA Ligase(400 U/μL)
       
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      批量采購， 請(qǐng)點(diǎn)擊詢價(jià)
       
       
      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
      Hieff® Novel T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建庫過程中DNA片段和接頭連接的單酶產(chǎn)品，該產(chǎn)品已經(jīng)過高通量測
      


      序驗(yàn)證，質(zhì)量優(yōu)異。本酶具有高效的連接能力，兼容各類樣本，對(duì)于復(fù)雜結(jié)構(gòu)核酸片段的連接更顯優(yōu)勢，比如華大平臺(tái)的Bubble接頭，均可得到優(yōu)異的測序質(zhì)量。
      


       
      


      產(chǎn)品組分
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號(hào)
      
			      		
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10298ES40
      
			      		
			
			
      10298ES42
      
			      		
			
			
      10298ES08
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10298-A
      
			      		
			
			
      Hieff® Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL)
      
			      		
			
			
      100 µL
      
			      		
			
			
      1 mL
      
			      		
			
			
      5 mL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10298-B
      
			      		
			
			
      10 × T4 DNA Ligase Buffer
      
			      		
			
			
      250 μL
      
			      		
			
			
      2×1.25 mL
      
			      		
			
			
      10×1.25 mL
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      運(yùn)輸和保存方法
      


      冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
      


       
      


      單位定義
      


      在20 μL的連接反應(yīng)體系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反應(yīng)30 min時(shí)，催化50%以上的DNA片段發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
      


       
      


      注意事項(xiàng)
      


      1）Buffer在融解時(shí)，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請(qǐng)顛倒混勻后使用。
      


      2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
      


      3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
      


       
      


      使用方法
      


        
	
      1. 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復(fù)和加A處理后一般不純化，直接進(jìn)行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業(yè)化末端修復(fù)加A體系兼容，進(jìn)行接頭連接。反應(yīng)體系請(qǐng)參考如下配制，渦旋瞬離后置于20℃，反應(yīng)15 min即可。
        2. 

      


      表1  Adapter Ligation體系
      


      
	
		
      
			
			
      名稱
      
			      		
			
			
      體積（μL）
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      dA-tailed DNA
      
			      		
			
			
      60
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      10 × T4 DNA Ligase Buffer
      
			      		
			
			
      10
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      50% PEG 6000
      
			      		
			
			
      10*
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      DNA Adapter
      
			      		
			
			
      X**
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Hieff® Novel T4 DNA Ligase
      
			      		
			
			
      1-5***
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      ddH2O
      
			      		
			
			
      To 100
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】：*試劑盒內(nèi)未提供50% PEG 6000，需自行準(zhǔn)備。
      


      **接頭用量參考表2。
      


      ***Hieff® Novel T4 DNA Ligase用量可根據(jù)需要添加1-5 μL。
      


        
	
      1. Adapter的質(zhì)量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產(chǎn)量。Adapter用量過高可能會(huì)產(chǎn)生較多Adapter Dimer；用量較低可能會(huì)影響連接效率及文庫產(chǎn)量。表2列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
        2. 

      


      表2  500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
      


      
	
		
      
			
			
      Input DNA
      
			      		
			
			
      Adapter : Input DNA摩爾比
      
			      		
			
			
      Input DNA
      
			      		
			
			
      Adapter : Input DNA摩爾比
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      1 μg
      
			      		
			
			
      10:1
      
			      		
			
			
      50 ng
      
			      		
			
			
      100:1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      500 ng
      
			      		
			
			
      20:1
      
			      		
			
			
      25 ng
      
			      		
			
			
      200:1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      250 ng
      
			      		
			
			
      40:1
      
			      		
			
			
      1 ng
      
			      		
			
			
      200:1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      100 ng
      
			      		
			
			
      100:1
      
			      		
			
			
      500 pg
      
			      		
			
			
      400:1
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。
      


      【接頭添加計(jì)算舉例】：當(dāng)Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時(shí)，接頭應(yīng)該添加多少？
      


      第一步，計(jì)算Input DNA摩爾數(shù)。公式：Input DNA摩爾數(shù)（pmol）≈ Input DNA質(zhì)量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；
      


      Input DNA摩爾數(shù)（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；
      


      第二步，計(jì)算接頭添加摩爾數(shù)。根據(jù)表2查詢接頭添加比例；
      


      根據(jù)表2，查得Input DNA 100 ng時(shí)接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數(shù)=100×0.5 pmol=50 pmol；
      


      第三步，計(jì)算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據(jù)其他接頭濃度參數(shù)）；
      


      接頭添加體積=接頭添加摩爾數(shù)（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
      


      綜上，接頭可添加3.4 μL。（注：接頭最大加入體積不超過5 μL）
      


       
      


      HB220621
      


       
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883