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      Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit焦磷酸(PPi)熒光檢測(cè)試劑盒
       
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      產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
      產(chǎn)品信息
      


      
	
		
      
			
			
      產(chǎn)品名稱(chēng)
      
			      		
			
			
      產(chǎn)品編號(hào)
      
			      		
			
			
      規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit焦磷酸(PPi)熒光檢測(cè)試劑盒
      
			      		
			
			
      50115ES70
      
			      		
			
			
      200 T
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      產(chǎn)品描述
      


      許多生化反應(yīng)，例如ATP水解、DNA和RNA聚合、腺苷酸環(huán)化酶形成的環(huán)AMP和脂肪酸的酶促活化以形成它們的輔酶A酯，都能產(chǎn)生焦磷酸鹽(PPi)，PPi能被無(wú)機(jī)焦磷酸酶水解。翌圣焦磷酸(PPi)熒光檢測(cè)試劑盒采用最可靠的焦磷酸鹽分光光度測(cè)定方法，使用專(zhuān)有的熒光PPi感受器(Ex/Em=316/456 nm)測(cè)定樣本PPi的含量，相對(duì)于傳統(tǒng)的酶偶聯(lián)方法更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定，是篩選酶活性或酶抑制劑的理想方法。
      


      該試劑盒已經(jīng)成功用于高通量篩選，適用于多種樣本，如：尿液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)提取物、組織裂解物等。
      


       
      


      產(chǎn)品組分
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號(hào)
      
			      		
			
			
       組分名稱(chēng)
      
			      		
			
			
      組分規(guī)格
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      50115-A
      
			      		
			
			
      Assay  Buffer
      
			      		
			
			
      25 mL×1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      50115-B
      
			      		
			
			
      PPi Sensor (Lyophilized)
      
			      		
			
			
      1 vial
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      50115-C
      
			      		
			
			
      Pyrophosphate Standard 
      
			      		
			
			
      1 mL×1, 50 mM
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      50115-D
      
			      		
			
			
      DMSO
      
			      		
			
			
      200 μL×1
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      運(yùn)輸和保存方法
      


      冰袋運(yùn)輸。-25~-15℃避光保存，有效期2年。
      


       
      


      注意事項(xiàng)
      


        
	
      1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
        2. 
	
      2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
        3. 
	
      3. 粉末溶解前請(qǐng)先短暫離心，以保證產(chǎn)品全在管底。
        4. 
	
      4. 請(qǐng)勿吸入、吞咽或者直接接觸皮膚和眼睛。
        5. 
	
      5. 本產(chǎn)品僅用于科研用途。
        6. 

      


       
      


      實(shí)驗(yàn)過(guò)程
      


      1、試劑準(zhǔn)備
      


      ① 200× PPi Sensor母液：將50 μL DMSO（D組分）加入PPi Sensor (Lyophilized)（B組分）中制備200× PPi Sensor母液，分裝-20°C避光保存，避免反復(fù)凍融。25 µL 200× PPi Sensor母液足以用于一塊96孔板。
      


      ② PPi標(biāo)準(zhǔn)液(1 mM)：向10 μL的50 mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（C組分）加入490 μL ddH2O或50 mM Hepes緩沖液(pH 7)，得到1 mM PPi標(biāo)準(zhǔn)溶液。
      


      ③ PPi標(biāo)準(zhǔn)液(PS7 - PS1)：向50 μL的1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液加入450 μL ddH2O或50 mM Hepes緩沖液(pH 7)，得到100 μM PPi標(biāo)準(zhǔn)溶液(PS7)。取100 μM PPi標(biāo)準(zhǔn)溶液，用ddH2O或50 mM Hepes緩沖液(pH 7)進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)玫竭B續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品(PS6-PS1)。
      


      ④ PPi Sensor工作液：25 μL的200× PPi Sensor母液加入5 mL的Assay Buffer（組分A，用前恢復(fù)至室溫），充分混合以制備PPi工作液。
      


      【注】：由于該檢測(cè)方法對(duì)PPi具有高靈敏度，因此必須使用不含PPi的實(shí)驗(yàn)室器具和試劑。DTT ≥ 1 mM會(huì)增加背景，MgCl2 ≥ 2 mM會(huì)抑制反應(yīng)。
      


        
	
      1. 根據(jù)表1和2中提供的布局向黑色96孔板中加入50 μL PPi標(biāo)準(zhǔn)品(PS)、空白對(duì)照品(BL, Assay buffer only)或測(cè)試樣本(TS)。對(duì)于384孔板，每孔加入25 μL。
        2. 

      


      【注】：建議尿液樣品可考慮稀釋1-10倍，血清和血漿樣品可考慮稀釋2-20倍后再進(jìn)行檢測(cè)，具體稀釋倍數(shù)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況而定。
      


      Table 1. Layout of Pyrophosphate standards and test samples in a solid black 96-well microplate. 
      


      
	
		
      
			
			
      BL
      
			      		
			
			
      BL
      
			      		
			
			
      TS
      
			      		
			
			
      TS
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS1
      
			      		
			
			
      PS1
      
			      		
			
			
      …
      
			      		
			
			
      …
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS2
      
			      		
			
			
      PS2
      
			      		
			
			
       
      
			      		
			
			
       
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS3
      
			      		
			
			
      PS3
      
			      		
			
			
       
      
			      		
			
			
       
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS4
      
			      		
			
			
      PS4
      
			      		
			
			
       
      
			      		
			
			
       
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS5
      
			      		
			
			
      PS5
      
			      		
			
			
       
      
			      		
			
			
       
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS6
      
			      		
			
			
      PS6
      
			      		
			
			
       
      
			      		
			
			
       
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS7
      
			      		
			
			
      PS7
      
			      		
			
			
       
      
			      		
			
			
       
      
			      		
		
      
	      

      


      PS = Pyrophosphate Standard (PS1 - PS7, 0.13 to 100 µM), BL = Blank Control, TS = Test Sample.
      


       
      


      Table 2. Reagent composition for each well.
      


      
	
		
      
			
			
      Well
      
			      		
			
			
      Volume
      
			      		
			
			
      Reagent
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      PS1 - PS7
      
			      		
			
			
      50 μL
      
			      		
			
			
      Serial Dilutions (0.13 to 100 µM)
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      BL
      
			      		
			
			
      50 μL
      
			      		
			
			
      Assay Buffer
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      TS
      
			      		
			
			
      50 μL
      
			      		
			
			
      Test sample
      
			      		
		
      
	      

      


        
	
      1. 對(duì)于96孔板，每孔加入50 μL PPi Sensor工作液，總測(cè)定體積為100 μL/孔；對(duì)于384孔板，每孔加入25 μL PPi工作液，總測(cè)定體積為50 μL/孔。
        2. 
	
      2. 混勻后，室溫孵育10-30 min。
        3. 
	
      3. 熒光酶標(biāo)儀下測(cè)量熒光讀值，Ex/Em = 316/456 nm (Cutoff = 420 nm)。
        4. 

      


       
      


      數(shù)據(jù)分析
      


      從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)用作陰性對(duì)照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值，以獲得基線(xiàn)校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和方程。該方程可以用于計(jì)算樣本中PPi含量。
      


      【注】：熒光背景會(huì)隨時(shí)間而增加，因此標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣本的熒光讀值計(jì)算前需減去空白孔的熒光強(qiáng)度值。
      


      


      圖1 代表性PPi標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
      


       
      


       
      


      HB240402
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883