產(chǎn)品簡介

 

BsmBI屬于Type IIs型內(nèi)切酶，可識別非回文序列，并在識別序列之外進(jìn)行切割，常用于Golden Gate組裝。本產(chǎn)品提供優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，可使BsmBI最大限度發(fā)揮功能，同時(shí)反應(yīng)緩沖液包含重組白蛋白，可增強(qiáng)多種酶的穩(wěn)定性。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	15203ES75 / 15203ES80
規(guī)格	300 U/ 1000 U
識別位置	5'-CGTCTC(N)1↓-3' 3'-GCAGAG(N)5↑-5'
推薦反應(yīng)條件	1×BsmBI Buffer；55°C孵育。
酶活	10 U/μL
失活條件	80℃孵育20 min

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	15203ES75	15203ES80
15203-A	BsmBI（10 U/μL）	30 μL	100 μL
15203-B	10×BsmBI Buffer	1 mL	1 mL

 

儲存條件

 

-25～-15℃保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性。

2. 受CpG甲基化影響，序列完全重疊，剪切受阻。

3. 受EcoBI甲基化影響，序列可能重疊，剪切可能受影響。

4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

 

質(zhì)量控制

 

1. 超長時(shí)間孵育檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg λDNA共孵育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，但延長孵育時(shí)間可能出現(xiàn)星號活性。

2. 酶切-連接-再酶切檢測：最適反應(yīng)溫度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切產(chǎn)物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接，將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

3. DNase殘留檢測：將1 μL酶與雙鏈DNA底物在37°C下孵育16 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，雙鏈DNA底物無變化。

 

使用方法

 

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）

組分	50 μL體系
10×BsmBI Buffer	5 μL
底物DNA*	1 μg
BsmBI（10 U/μL）	1 μL
ddH2O	up to 50 μL

*DNA底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響B(tài)smBI酶活性。

注：反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性。

2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴。

3）55°C孵育15 min-1 h。一般推薦5-10 U酶/μg質(zhì)粒DNA，10-20 U酶/μg基因組DNA，孵育1 h。如需過夜酶切，請將酶量調(diào)整為1 U。

4）停止反應(yīng)（可選）：80°C孵育20 min即可使酶失活，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

5）如進(jìn)行小體系，可參考如下反應(yīng)體系（冰上操作）

組分	10 μL體系	25 μL體系
10×BsmBI Buffer	1 μL	2.5 μL
底物DNA*	0.1 μg	0.5 μg
BsmBI（10 U/μL）	1 U	5 U
ddH2O	up to 10 μL	up to 25 μL

注：為避免蒸發(fā)，10 μL反應(yīng)體系的孵育時(shí)間不應(yīng)超過1 h。

2. 不同DNA中的識別位點(diǎn)數(shù)

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	M13mp18/19	Adeno2
14	0	1	2	2	1	21

3. 甲基化修飾影響

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
無影響	無影響	序列完全重疊，剪切阻斷	無影響	序列可能重疊，剪切可能受影響

 

Ver.CN20230731