本產(chǎn)品采用DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到得感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化，廣泛適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳，適用于藍(lán)白斑篩選。DH5α細(xì)胞重組酶recA1和核酸內(nèi)切酶endA1基因缺失突變使其能保證克隆DNA的穩(wěn)定性。F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育，只需10 min即可完成一次轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率約達(dá)10⁸ cfu/μg DNA。

DH5α細(xì)胞基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	11803ES80
11803-A	F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞	10×100 μL
11803-B	pUC19 (control vector, 10 pg/μL)	10 μL

 

儲存條件

-85℃~-65℃保存，有效期6個月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。

 

使用方法

1. 快速轉(zhuǎn)化操作方法（10 min）

1）提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。

2）將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上，待菌體融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），輕輕彈勻，冰浴靜置5 min。

*所加DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

3）用200 μL移液槍將上一步的混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上，均勻涂布。

4）將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h。

2. 快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法（25 min，可提高轉(zhuǎn)化效率）

1）將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上，待菌體融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），輕輕彈勻，冰浴靜置5 min。

*所加DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

2）42℃水浴熱激45 sec，迅速插回冰上靜置2 min，此過程不要晃動。加入700 μL不含抗生素的LB，37℃，200 rpm復(fù)蘇10分鐘，均勻涂板。

3）將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h。

3. 常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化操作方法 

1）將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上，冰浴、解凍（大約5 min）。

2）立即向解凍后的感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕彈勻，冰浴靜置25 min。

*所加DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

3）42℃水浴中熱激45 sec，然后快速將EP管轉(zhuǎn)移到冰上，靜置2 min。

*此過程不要晃動，否則會降低轉(zhuǎn)化效率。

4）向離心管中加入700 μL左右不含抗生素的LB或2YT培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60 min。

5）5,000 rpm離心1 min收集菌體，留取100 μL左右上清涂布至含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)板上，37℃培養(yǎng)過夜。如進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，請將平板放 37℃培養(yǎng)至少15 h。

 

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品不可反復(fù)凍融，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2. 本產(chǎn)品在冰中解凍時間不宜過長，感受態(tài)細(xì)胞剛化凍時轉(zhuǎn)化效率最高。

3. 加入質(zhì)粒應(yīng)輕柔操作。

4. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞既可以快速轉(zhuǎn)化也可以常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化，對于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建，為提高轉(zhuǎn)化效率，可采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

5. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效率下降（無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大）。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可增加孵育步驟。

6. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

7. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                      Ver.CN20230928