小鼠白介素1β (Mouse IL-1β/IL-1F2)作為IL-1家族主要成員,也主要由活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,并通過誘導(dǎo)IL-2釋放、促進(jìn)B細(xì)胞成熟與增殖以及成纖維細(xì)胞生長因子激活來刺激胸腺細(xì)胞增殖,也可刺激滑膜細(xì)胞釋放前列腺素及各種膠原酶。IL-1β在免疫和炎癥反應(yīng)、骨重塑、發(fā)熱、碳水化合物代謝等生理現(xiàn)象起著核心作用。異常的IL-1β信號通過促進(jìn)上皮向間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、增加炎性細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生、誘導(dǎo)免疫抑制和細(xì)胞凋亡抵抗以及增加白細(xì)胞粘附來驅(qū)動腫瘤發(fā)生。IL-1β導(dǎo)致炎癥的發(fā)生疾病包括糖尿病、關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化,此外IL-1β的異常激活也與大多數(shù)癌癥類型的不良預(yù)后有關(guān),包括結(jié)腸癌、肺癌和乳腺癌等。
翌圣Mouse IL-1β/IL-1F2 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,用于定量測定血清、血漿中的小鼠白介素1β(Mouse IL-1β/IL-1F2)。特異性抗小鼠白介素1β抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本,經(jīng)過孵育,樣本中存在的小鼠白介素1β與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入檢測抗體孵育結(jié)合,經(jīng)洗滌,再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中小鼠白介素1β的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產(chǎn)品信息
貨號 |
98024ES48 / 98024ES96 |
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
檢測范圍 |
15.63-1000 pg/mL |
檢測方法 |
雙抗夾心法 |
檢測時長 |
4.5小時 |
靈敏度 |
11.46 pg/mL |
稀釋線性 |
89 - 123% |
回收率 |
78 - 107% |
板內(nèi)差 |
4.0% |
板間差 |
3.9% |
實驗數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,生成的標(biāo)曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。
IL-1β/IL-1F2的最低檢測限為11.46 pg/mL,通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計算得出。
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定8次,評估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測24次,評估酶標(biāo)板間的精密度。
項目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
||||
樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
10 |
10 |
10 |
30 |
30 |
30 |
|
平均值 |
489.74 |
119.91 |
29.16 |
476.65 |
119.32 |
30.79 |
標(biāo)準(zhǔn)差 |
23.16 |
5.94 |
0.74 |
22.08 |
5.57 |
0.81 |
變異系數(shù)(%) |
4.7 |
5.0 |
2.5 |
4.6 |
4.7 |
2.6 |
通過不同水平的IL-1β/IL-1F2添加于樣本中來測定回收率,其回收率如下:
樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍(%) |
血清 |
94.6 |
81.2-107.6 |
血漿 |
82.8 |
78.0-91.0 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
87.9 |
81.4-94.1 |
血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
103.0 |
98.1-106.9 |
1:04 |
105.5 |
101.3-106.6 |
1:08 |
111.3 |
105.2-123.3 |
1:16 |
94.5 |
89.5-98.3 |
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
103.6 |
101.2-106.2 |
1:04 |
105.3 |
101.8-107.7 |
1:08 |
107.0 |
105.9-107.6 |
1:16 |
101.5 |
96.4-106.2 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍(%) |
1:02 |
98.0 |
94.8-100.0 |
1:04 |
98.5 |
91.1-103.4 |
1:08 |
102.9 |
95.0-107.6 |
1:16 |
100.1 |
90.8-104.9 |
應(yīng)用本試劑盒,檢測若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。
樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值(mg/mL) |
樣本值(mg/mL) |
血清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
血漿 |
8 |
n.d. |
n.d. |
細(xì)胞培養(yǎng)上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得15.63 pg/mL
本試劑盒識別天然和重組小鼠白介素1β。下述因子進(jìn)行了特異性的評估,沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
||
IL-1α |
IL-10 |
IL-1α |
IL-12 |
IL-1β |
IL-12 |
IL-2 |
IL-13 |
IL-2 |
IL-13 |
IL-3 |
IFN-γ |
IL-3 |
IFN-γ |
IL-4 |
TNF-α |
IL-4 |
TNF-α |
IL-6 |
VEGF |
IL-6 |
VEGF |
IL-10 |
|
檢測簡圖
疑問解答
問題 |
造成原因 |
解決方法 |
標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器,按時校準(zhǔn),仔細(xì)操作,充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
稀釋方法不恰當(dāng) |
||
顯色值偏低 |
孵育時間太短 |
給予足夠的孵育時間,樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序;如果使用洗板機(jī),檢查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
|
靈敏度較低 |
試劑盒儲存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |