Strep-Tag II為8個氨基酸的小標(biāo)簽（WSHPQFEK），由于標(biāo)簽小，僅為1.06 kDa左右，不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，因此無需去除該標(biāo)簽。其特異性高，單步純化純度高，純化條件溫和，蛋白兩端均可融合等突出特點迅速得到了廣泛應(yīng)用。Twin Strep-tag II是一個順序排列的兩個Strep-tag II序列（通過內(nèi)部氨基酸連接），該標(biāo)簽?zāi)軌蛳馭trep-tag II一樣進(jìn)行溫和、快速的純化。

Streptactin 是最穩(wěn)定的蛋白之一，其偶聯(lián)至高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球上，可用于各種表達(dá)系統(tǒng)，包括桿狀病毒、哺乳動物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌中含有Strep-Tag II標(biāo)簽蛋白純化，同時該樹脂也可用于 Twin Strep-Tag II 標(biāo)簽純化。

Streptactin 4FF Chromatography Column是一種以Streptactin Agarose Resin 4FF為填料的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格1 mL，該預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠
配體	Streptactin
粒徑	45-165 µm
載量	3-5 mg Twin Strep-Tag II 蛋白/mL 基質(zhì)
最大流速	300 cm/h
儲存緩沖液	含20%乙醇的1×PBS

 

儲存條件

2~8℃保存，有效期2年。

 

使用說明

1 緩沖液的準(zhǔn)備

所用水和緩沖液在使用之前建議用 0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。

平衡/洗雜液: 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0或PBS：50 mM sodium phosphate,280 mM NaCl, 6 mM potassium chloride, pH7.4。

洗脫液: 在平衡/洗雜液中添加2.5 mM的脫硫生物素或D-生物素混勻即可。

再生液：平衡液中加入1 mM HABA（洗脫劑為脫硫生物素）或1 M NaOH（洗脫劑為D-生物素）。 

2  樣品準(zhǔn)備

樣品在上樣前建議用 0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾，防止堵塞柱子。

3 樣品純化（以Akta為例）

1）準(zhǔn)備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。 

3）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

4）上樣：利用泵或樣品環(huán)上樣。

注意:樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的

樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。 

5）洗雜：用平衡/洗雜液沖洗柱子，直到紫外吸收達(dá)到一個穩(wěn)定的基線（一般至少 10~15 個柱體積）。 

6）洗脫：使用 5~10 倍柱體積的洗脫液洗脫，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

7）清洗與保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

4 SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測，判定其純化效果。

5 填料再生和清洗

5.1 再生

5.1.1 洗脫劑為脫硫生物素

1）5倍柱體積的去離子水清洗柱子；

2）15倍柱體積的含1 mM HABA的平衡液再生；

3）30 倍柱體積平衡液清洗；

注：脫硫生物素被黃色溶液HABA取代，HABA一旦與Streptactin復(fù)合即變?yōu)榧t色。HABA隨后被平衡液除去，柱子可被重復(fù)使用10次左右。

5.1.2 洗脫劑為D-生物素

1）5倍柱體積的去離子水清洗柱子；

2）15倍柱體積的1 M NaOH再生；

3）30 倍柱體積平衡液清洗；

注：D-生物素與Streptactin結(jié)合緊密，高濃度氫氧化鈉清洗后載量只能達(dá)到初始載量的50%左右。

5.2 保存

填料再生清洗后保存在等體積的保護(hù)液中，2~8℃保存。

 

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231026