產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
產(chǎn)品簡介
ECL化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。洗膜后用本產(chǎn)品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數(shù)分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數(shù)秒到數(shù)小時，顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。
本試劑盒采用了獨特的發(fā)光底物系統(tǒng)，ECL化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑。
翌圣為您提供Western Blot實驗整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購請參考：WB實驗系列產(chǎn)品-選購指南
產(chǎn)品特點
1.具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測低皮克級抗原；
2.發(fā)光迅速，亮度強，可在日光燈下觀察到印跡膜條帶；
3.持續(xù)發(fā)光時間長，熒光可使X光膠片感光達5小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測；
4.可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1∶2000～1∶10000)，大大節(jié)省抗體。
產(chǎn)品信息
|
組分編號 |
組分名稱 |
36208ES60（100 mL） |
36208ES76（500 mL） |
|
36208-A |
A液 |
50 mL |
250 mL |
|
36208-B |
B液 |
50 mL |
250 mL |
儲存條件
2~8℃避光保存。有效期1年。
使用說明
1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或者HRP標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。
【注】：ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)最終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。
2. 最后一次洗膜的同時，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。
【注】：建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液（125μL發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。
【注】：孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低發(fā)光液使用比例。
4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
6. 暗房內(nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
注意事項
1.步驟1~5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。
2.長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
3.發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1~10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
4.由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強烈推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗1∶1000~1∶4000，二抗1∶2000~1∶5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
5.某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
6.使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
7.疊氮化鈉（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。
8.本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。
9.本產(chǎn)品僅作科研用途！
10.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230726
