翌圣SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。洗膜后用本產(chǎn)品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數(shù)分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數(shù)秒到數(shù)小時(shí)，顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本試劑盒采用了獨(dú)特的發(fā)光/增強(qiáng)底物系統(tǒng)，降低曝光背景的同時(shí)引入新型的氧化劑，大大提高試劑盒的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)低飛克級(jí)的免疫印跡檢測。除用于X光片，還可用于自動(dòng)成像系統(tǒng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測低飛克級(jí)抗原；

2）持續(xù)發(fā)光時(shí)間長，熒光可使X光膠片感光達(dá)8小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測；

3）可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)，大大節(jié)省抗體：

一抗（儲(chǔ)液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:5000-1:100000；

二抗（儲(chǔ)液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:100,000-1:500,000。

產(chǎn)品組分

組分編號(hào)	組分名稱	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
		36224ES10（10ml）	36224ES60（100ml）	36224ES70（200ml）	36224ES76（500ml）
36224-A	MaxiSignal ECL-A液	5ml	50ml	100ml	250ml
36224-B	MaxiSignal ECL-B液	5ml	50ml	100ml	250ml

運(yùn)輸與保存方法
 

常溫運(yùn)輸。4 ºC保存。【注】：A液（36224-A）需避光保存！有效期1年。

 

操作方法

【較理想的Western blot 結(jié)果需要優(yōu)化所涉及的各個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，如樣品上樣量、凝膠類型、轉(zhuǎn)膜方法、膜類型、封閉試劑、一抗?jié)舛?、二抗?jié)舛燃跋鄳?yīng)孵育時(shí)間等。另外，每個(gè)環(huán)節(jié)盡量提供足量的孵育試劑，以避免膜干燥?！?/span>

 1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或者HRP標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)最終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。
 2. 最后一次洗膜的同時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。

【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭；
3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液（100~200μl發(fā)光工作液/cm2膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3-5分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。

【注】：孵育時(shí)間過長不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低發(fā)光液使用比例。
4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜完全干燥。不可洗去發(fā)光液。
5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
6. 暗房內(nèi)取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，分別曝光不同的時(shí)間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘，定影顯影沖洗。【注】：曝光時(shí)間需根據(jù)曝光強(qiáng)度做相應(yīng)的調(diào)整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時(shí)壓片。

注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）步驟1～5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈
3）長時(shí)間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
4）發(fā)光工作液孵育約3-5分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
5）由于發(fā)光液靈敏度高，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗（儲(chǔ)液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:5000-1:100000；二抗（儲(chǔ)液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:100,000-1:500,000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
6）某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
7）避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8）使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
9）使用生物素-親和素系統(tǒng)，避免使用牛奶封閉，可能會(huì)導(dǎo)致背景過高。
10）金屬氧化物顆粒可能會(huì)造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn)，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。
11）疊氮化鈉（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN3。
12）本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。
13）本產(chǎn)品僅作科研用途！
 

附 常見問題及解答

膠片成像相反（如白色條帶，黑色背景）	檢測體系HRP過量	進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。
膜上呈現(xiàn)棕色或黃色條帶
避光條件下膜上具有發(fā)光斑點(diǎn)
信號(hào)持續(xù)時(shí)間少于8h
信號(hào)較弱	檢測體系HRP過量導(dǎo)致消耗更多底物，導(dǎo)致信號(hào)減弱	進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。
	抗原抗體量較少	增大抗體和抗原的使用量。
	轉(zhuǎn)膜效果不佳	優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件，提高轉(zhuǎn)膜效率。
	HRP酶活力或底物活力下降	于暗室中準(zhǔn)備1-2ml 本品制備的發(fā)光液，關(guān)燈后，加入1µl待檢測 HRP 標(biāo)記物，該混合液會(huì)立即產(chǎn)生藍(lán)色的光，且在后繼幾分鐘內(nèi)消退。如果沒有，請檢測另1支HRP標(biāo)記物進(jìn)行進(jìn)一步檢測。
背景較高	檢測體系HRP過量	進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。
	封閉不充分	優(yōu)化封閉條件。
	封閉劑不合適	換用合適的封閉劑。
	清洗不充分	增加清洗此時(shí)，延長清洗時(shí)間。
	膠片曝光過度	降低曝光時(shí)間。
	抗原或抗體濃度較高	降低抗原抗體使用量。
	抗體質(zhì)量差	換用高質(zhì)量抗體。
蛋白條帶內(nèi)有斑點(diǎn)	轉(zhuǎn)膜不充分	優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件。
	膜水化不充分	按照廠家說明書優(yōu)化膜的水化條件。
	膜和膠片間存在氣泡	趕走氣泡。
曝光膠片上呈現(xiàn)斑點(diǎn)背景	HRP標(biāo)記物形成聚合物	用0.2um濾膜過濾HRP標(biāo)記物。
非特異性條帶	檢測體系HRP過量	進(jìn)一步稀釋HRP偶聯(lián)試劑。
	SDS造成非特異性結(jié)合	轉(zhuǎn)膜后洗膜，去除SDS。
	抗體質(zhì)量差	換用高質(zhì)量抗體。
	封閉不充分	延長封閉時(shí)間或換用合適封閉劑。

相關(guān)產(chǎn)品
 

36222ES60	Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒	100ml
36222ES76		500ml
36222ES80		1000ml
36208ES60	Super ECL Detection Reagent ECL化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒	100ml
36208ES76		500ml
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36223ES60	SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate持久性化學(xué)發(fā)光底物	100ml
36223ES70		200ml
36223ES76		500ml
36224ES60	SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物	100ml
36224ES70		200ml
36224ES76		500ml