Rapamycin雷帕霉素屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，與普樂可復的結(jié)構(gòu)相似，但卻有非常不同的免疫抑制機制。Rapamycin是特異性的mTOR抑制劑（IC50約為0.1 nM）。Rapamycin與細胞內(nèi)受體FKBP-12結(jié)合形成復合物后，直接作用于mTOR中的FRB（FKBP-12-rapamycin binding）結(jié)構(gòu)域從而抑制蛋白活性。Rapamycin選擇性抑制IL-2誘導的p70 S6激酶磷酸化與功能活化，也可以促使4E-BP1/PHAS1去磷酸，從而加強與eIF4E的結(jié)合并使之失活。Rapamycin能夠阻斷蛋白合成，誘導細胞周期停滯在G1期。
不同于FK506和其他免疫抑制劑，Rapamycin以非凋亡的方式阻斷活化T細胞增殖治療器官或骨髓移植中發(fā)生的排斥反應(yīng)，比傳統(tǒng)治療方法副作用更少。
Rapamycin雷帕霉素結(jié)構(gòu)式
客戶使用本產(chǎn)品發(fā)表的科研文獻
圖1. 客戶發(fā)表文章截圖[1]
研究團隊采用特異性PI3K抑制劑（LY294002）、mTOR抑制劑（Rapamycin雷帕霉素）和特異性的Nrf2的siRNA來驗證Nrf2的上調(diào)與PI3K/Akt通路的激活相關(guān)。
圖2.客戶使用Wortmannin渥曼青霉素和Rapamycin雷帕霉素的截圖[1]
永生化人角質(zhì)形成細胞（HaCaT）在含高糖（4500 mg/L）（青霉素/鏈霉素）和10%（v/v）胎牛血清的DMEM中，置于5% CO2，37°C中培養(yǎng)。為了建立長期亞砷酸鹽暴露細胞模型，HaCaT細胞連續(xù)用亞砷酸鈉NaAsO2（終濃度為1.0 μM）處理。此外，為了分析亞砷酸鹽對轉(zhuǎn)化細胞自噬的影響，將亞砷酸鹽暴露的HaCaT細胞與自噬起始抑制劑Wortmannin渥曼青霉素（200 nM, 30 min）、自噬降解抑制劑Bafilomycin A1（100 nM, 4 h）和自噬起始激活劑Rapamycin雷帕霉素（50 nM, 4 h）預孵育，再用8 μM亞砷酸鹽刺激細胞24 h。[1]
分析亞砷酸鹽對細胞轉(zhuǎn)化、細胞自噬的影響。將HaCaT細胞和T-HaCaT細胞重新接觸亞砷酸鹽（0、2、4、6、8 μM；24 h），以評價亞砷酸鹽誘導的抗氧化劑的變化。數(shù)據(jù)表明，在HaCaT和T-HaCaT細胞中，亞砷酸鹽和Wortmannin渥曼青霉素預孵育后，LC3I下降；而在Bafilomycin A1或Rapamycin雷帕霉素存在的亞砷酸鹽下，LC3I升高。見下圖三。
圖3.E. 再次暴露于亞砷酸鹽（8 μM）之前，分別用Wortmannin（30 min）、Bafilomycin A1（4 h）、Rapamycin（4 h）的HaCaT細胞對LC3II/LC3I進行免疫印跡分析 F. LC3II/LC3I在HaCaT和T-HaCaT細胞中的相對表達[1]
為了分析Nrf2與砷誘導HaCaT細胞的相互作用，我們采用特異性siRNA和激活劑檢測Nrf2、p62、LC3、Bcl2和Beclin1在HaCaT細胞和T-HaCaT細胞中的表達情況。如下圖所示，長期暴露于亞砷酸鹽后，轉(zhuǎn)染的T-HaCaT細胞中Beclin1和LC3iIi/LC3I的表達增加，Nrf2、p62和Bcl2的表達顯著降低。經(jīng)自噬激活劑Rapamycin雷帕霉素處理后，T-HaCaT細胞中Beclin1和LC3II/LC3I的表達水平顯著增加。見下圖四。
圖4.C+D. 免疫blot分析，HaCaT細胞和雷帕霉素（Rapa）處理的T-HaCaT細胞中Beclin1、LC3II/LC3I、p62和Nrf2的(D)相對表達水平[1]
為了探討Nrf2與PI3K/Akt/mTOR信號通路之間的關(guān)系，我們分別將Nrf2 siRNA、PI3K抑制劑（LY294002）和mTOR抑制劑（Rapamycin雷帕霉素）應(yīng)用于T-HaCaT細胞。LY294002抑制了PI3K的激活，導致p-Akt、p-mTOR和Nrf2的表達顯著降低，同時在T-HaCaT細胞中，Beclin1和LC3II/LC3I的誘導量顯著增加。轉(zhuǎn)染了Nrf2 siRNA顯著降低了p-mTOR和p62的表達，但增加了T-HaCaT細胞中Beclin1和LC3II/LC3 I的誘導表達。
與對照組相比，p-PI3K和p-Akt的誘導率無顯著性差異。此外，我們還使用mTOR抑制劑（Rapamycin雷帕霉素）驗證了Nrf2和mTOR之間的關(guān)系。
Rapamycin雷帕霉素抑制的mTOR激活誘導Beclin1和LC3II/LC3的表達顯著增加，而在T-HaCaT細胞中Nrf2和p62的表達沒有顯著變化，見下圖五。這些數(shù)據(jù)表明，亞砷酸鹽通過PI3K/Akt通路促進Nrf2的上調(diào)，并與上調(diào)-調(diào)節(jié)其下游的mTOR，從而抑制HaCaT細胞中的自噬起始。
圖5.E+F. Western blot分析和m-TOR、Nrf2、Beclin1、LC3II/LC3 I和p62在HaCaT細胞和雷帕霉素（Rapa）（50 nM）處理的T-HaCaT細胞中的相對表達水平[1]
1. 純度高
2. 性能穩(wěn)定
3. 規(guī)格齊全
4. 質(zhì)檢保證
5. 售后無憂
Rapamycin雷帕霉素圖譜（HPLC）
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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52404ES10 |
10 mg |
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52404ES50 |
50 mg |
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52404ES60 |
100 mg |
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52404ES76 |
500 mg |
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52404ES80 |
1 g |
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52405ES03 |
1 mg |
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52405ES10 |
10 mg |
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52403ES08 |
5 mg |
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52403ES10 |
10 mg |
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52403ES50 |
50 mg |
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53768ES76 |
500 μg |
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53768ES80 |
1 mg |
[1] Wu J, et al. Long-term arsenite exposure decreases autophagy by increased release of Nrf2 in transformed human keratinocytes. Sci Total Environ. 2020 Sep 10;734:139425. doi: 10.1016/j.scitotenv.2020.139425. Epub 2020 May 13. PMID: 32450402.
