01 PCR產物的純化是獲得高質量模板的核心
Sanger測序是一個高度精確的技術，可以逐個堿基讀出 DNA 序列，對模板的純凈度有著極高的要求。然而，PCR產物中的游離引物和核苷酸往往會干擾測序結果。如何在不損耗珍貴樣本的前提下，獲取干凈、高質量的模板，是一個急需解決的難題。
圖1.Sanger測序原理
在這種情況下，PCR產物的純化成為了眾多科研工作者的首選策略。傳統的PCR純化方法，如乙醇醋酸鈉純化、磁珠純化或柱純化，雖然有效，但往往耗時耗力，且在操作過程中容易損失樣本。對于樣本量有限的研究者來說，這無疑是一個相當棘手的問題。
翌圣生物提供的酶法PCR純化法有著非常簡單直接的工作流程，只有一個移液步驟。只需將核酸外切酶（Exonuclease I）和堿性磷酸酶加入PCR產物中，并在37℃靜置15~30 min，即可完成純化。這種方法不僅操作簡便，而且大大減少了樣本的損失，特別適合樣本量有限的研究。
02 PCR酶法純化是如何降解游離的引物和核苷酸，而不影響dsDNA目的產物
關鍵在于Exonuclease I！
Exonuclease I是一種對變性或單鏈脫氧核糖核酸具有高度選擇性的核酸外切酶，作用時，Exonuclease I從引物（單鏈聚脫氧核糖核苷酸）的3 羥基端開始攻擊，隨后逐步釋放出脫氧核糖核苷5 ' -單磷酸鹽，但末端二核苷酸會保持完整。Exonuclease I對雙鏈DNA或RNA無活性，因此不會降解目標產物dsDNA。接著，堿性磷酸酶將反應體系中的核苷酸去磷酸化，去磷酸化意味著反應體系中dNTP失去活性，從而不會影響測序反應。這是因為測序反應體系中的dNTP:ddNTP需要遵循特定比例，任何比例的偏差都可能引起不可預測的測序結果。（點擊鏈接，獲取更多Exonuclease I產品詳情）
圖2.Exonuclease I反應原理
03 PCR酶法純化會影響后續(xù)的測序嗎？
答案是：不會！
只需將反應混合物加熱至80℃并保持15 min，即可使酶失活，得到干凈的PCR擴增產物，直接用于測序反應。整個過程快速高效，無需額外的純化步驟，也不會造成樣本的損失。
翌圣PCR產物純化解決方案
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產品名稱 |
產品貨號 |
規(guī)格 |
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Exonuclease I(20 U/μL) |
1000 U/5000 U |
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Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/µL) |
250 U |
